蛋白質(zhì)和主要必需氨基酸的測(cè)定-在線瀏覽
2025-06-19 13:42本頁(yè)面
【正文】 質(zhì)的共性，即 含氮量； (2)利用蛋白質(zhì)中 特定氨基酸殘基、酸 (堿 ) 性基團(tuán)和芳香基團(tuán) 測(cè)定蛋白質(zhì)含量。 ? 粗蛋白質(zhì)： 開(kāi)氏法測(cè)定結(jié)果中因其含有氨基酸、酰胺等非蛋白質(zhì)氮，故稱“ 粗蛋白質(zhì) ” ? 純蛋白質(zhì)： 開(kāi)氏法測(cè)定中，如果蛋白質(zhì)用重金屬鹽等沉淀分離以后，進(jìn)行全氮測(cè)定，由氮換算而成的蛋白質(zhì)的含量，則稱為“ 純蛋白質(zhì) ”?？捎瞄_(kāi)氏法消煮定氮，再將測(cè)得的含氮值乘以蛋白質(zhì)換算系數(shù)，即得粗蛋白質(zhì)含量。 注意問(wèn)題 ? 籽粒樣品在開(kāi)氏法分解時(shí)， 硝態(tài)氮的部分氨化 是不可避免的。 ? 開(kāi)氏法 是測(cè)定全氮量的經(jīng)典方法，是丹麥人開(kāi)道爾()于 1883年用來(lái)研究蛋白質(zhì)變化的，后來(lái)被用于測(cè)定各種形態(tài)的有機(jī)氮。至今尚無(wú)別的方法能與其比擬或?qū)⑵淙〈? 開(kāi)氏法介紹 ? 開(kāi)氏法 是測(cè)定全氮量的經(jīng)典方法，是丹麥人開(kāi)道爾于 1883年用來(lái)研究蛋白質(zhì)變化的，后來(lái)被用于測(cè)定各種形態(tài)的有機(jī)氮。 開(kāi)氏法介紹 有機(jī)氮 銨鹽 NH3 NH4+ ? 開(kāi)氏法也有 缺點(diǎn) ，主要是 操作手續(xù)較繁，分析的速度較慢，試劑費(fèi)用較高 。 ? 瑞典的 Tecator公司生產(chǎn)的開(kāi)氏 1030分析儀 (Kjeltec Auto 1030 Analyzer)、日本生產(chǎn)的 kjelAuto自動(dòng)氮和蛋白質(zhì)分析儀和丹麥 FOSS公司生產(chǎn)的 Kjel— FOSS自動(dòng)蛋白質(zhì)分析儀等。L1 H3BO3— 指示劑溶液：稱取 H3BO3 (分析純 )20g溶于 1L水中 。 ? molL 1 HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液 。 (1) 樣品的消煮 稱取烘干樣品 (過(guò) ) ~ 50mL或100mL開(kāi)氏瓶或消煮管中，加入 混合催化劑 ，加幾滴水濕潤(rùn)后，加 5mL濃 H2SO4，小心輕搖后 (最好加塞放置過(guò)夜 )，蓋上 小漏斗 ，將消煮管放置在 消煮爐 上，開(kāi)始時(shí)用小火加熱，待消煮液呈棕色時(shí)，可提高溫度，消煮至溶液呈清亮帶淺藍(lán)色時(shí)，再加熱約 10min，取下冷卻至溫?zé)釙r(shí)，將消煮液無(wú)損地轉(zhuǎn)入 100mL容量瓶中，冷卻至室溫后定容并放置澄清。同時(shí)作空白試驗(yàn)和核對(duì)試驗(yàn)。 ? 以 定量蛋白質(zhì)為目的的總氮量測(cè)定 中，開(kāi)氏法分解時(shí)，硝態(tài)氮的部分氨化是不可避免的，因此 蔬菜類 特別是可能含有硝態(tài)氮的化合物的樣品，需要用 水楊酸固定硝態(tài)氮化合物 ，用開(kāi)氏分解測(cè)定總氮量 。 注意問(wèn)題 ? 本法測(cè)定的結(jié)果為 粗蛋白質(zhì) 的含量。L1 ~ 250gL1三氯乙酸等處理，將蛋白質(zhì)從水溶液中沉淀出來(lái)，再測(cè)定此沉淀的全氮量，乘以蛋白質(zhì)的換算系數(shù)即可得：“ 純蛋白質(zhì) ”量。 二、同類種子中蛋白質(zhì)的測(cè)定 (染料結(jié)合 DBC法 ) ? 主要儀器 ? 試劑 ? 操作步驟 ? 結(jié)果計(jì)算 ? 參見(jiàn)教材 P286 二、同類種子中蛋白質(zhì)的測(cè)定 (染料結(jié)合 DBC法 ) ? 該法是 間接測(cè)定 種子中蛋白質(zhì)的方法。 ? 不適用 隨意混合物的樣品的測(cè)定 。 注意問(wèn)題 方法原理 ? 蛋白質(zhì)的 肽鍵 結(jié)構(gòu)，具有類似于雙縮脲的反應(yīng)基團(tuán)。這種顏色反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng) (或稱縮二脲反應(yīng) )。故可用此反應(yīng)進(jìn)行蛋白質(zhì)的測(cè)定。 三、同類種子中蛋白質(zhì)的測(cè)定 (雙縮脲法 ) ? 適用于 大批品種篩選、育種 等工作中的蛋白質(zhì)測(cè)定。而 異丙醇雙縮脲試劑 ，可以減少這些物質(zhì)的溶解， 排除干擾 。采用室溫 2025℃ ，須于 120～ 190min內(nèi)比色； 40℃ 為 1570 min顯色穩(wěn)定；而在 60℃ 連續(xù)振蕩條件下顯色，則反應(yīng)時(shí)間縮短為 5min。 ? 測(cè)定氨基酸總量
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1