第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測(cè)定第一節(jié)概述(文件)
【正文】 頁(yè)）。 ② %百里酚酞乙醇溶液， ③ %中性紅 50%乙醇溶液， ④ mol/L 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 二．個(gè)別氨基酸的定量測(cè)定 介紹了 8種氨基酸的定量測(cè)定方法。 （一）原理： 取一定量經(jīng)水解的樣品溶液，滴在制好的薄層板上，在溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行雙向上行法展開(kāi)， 樣品各組分在薄層板上經(jīng)過(guò)多次的被吸附、解吸、交換等作用，同一物質(zhì)具有相同的 Rf值，不同成分則有不同的 Rf值，因而各種混合物可達(dá)到彼此被分離的目的。 ③ 能夠使用多種顯色劑。 ? 缺點(diǎn)： Rf值重現(xiàn)性比紙上層析差 。 、微量吸管或微量注射器。 ， 下端浸入展開(kāi)劑 1cm， 千萬(wàn)別讓溶劑浸過(guò)了樣點(diǎn) 。 Ⅱ .用小載波片試驗(yàn) ， 微量展開(kāi)劑展開(kāi) 5cm。 ： 上行法 、 下行法 、 雙向展開(kāi) 、 單向多次展開(kāi) 、 雙向多次展開(kāi) 。 （涂板時(shí)把 熒光指示劑加入到固體吸附劑中） 定性：在同一塊板上 ， 同等條件下操作 ， 被測(cè)樣與標(biāo)準(zhǔn)樣同時(shí)展開(kāi) 、 顯色 ， 同 Rf 值即是； 查手冊(cè)找相同的 Rf 值 。 ： 例：日本島津 CS—— 910 型雙波長(zhǎng)薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀： 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產(chǎn) 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國(guó) Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀（日本日立公司，帶紫外檢測(cè)器、記錄器和自動(dòng)收集器，制備量可達(dá) 10g 。 4. TLC法原理、方法， Rf值的作用及計(jì)算方法。 2. 雙縮脲法測(cè)定原理。 。 ，在紫外光下觀察斑點(diǎn)。 樣品極性大 ， 選吸附劑活性低 ， 展開(kāi)劑極性高 。 ：主要是低沸點(diǎn)的 2～ 3種有機(jī)溶劑組成的溶劑系統(tǒng) ， 分離效果主要決定于展開(kāi)劑的選擇 ， 因?yàn)槲絼┰谝欢ㄇ闆r下是恒定的 ，吸附劑的選擇余地遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于展開(kāi)劑的選擇 。 ф3 mm 濾紙片，浸入樣液，埋到 板子上先挖好一個(gè)小洞穴。 （三）操作方法： ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點(diǎn)樣：距薄板底端 2cm處，用針畫(huà)一標(biāo)記作為 原點(diǎn)。（比紙層析高 10— 100倍） 精確到 。 ? Rf = a / b a b 樣點(diǎn) 溶劑前沿 點(diǎn)樣原點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： ① 展開(kāi)時(shí)間短，一般在 20— 30分鐘，展開(kāi)距離通常只需 10 cm，且分離效果好。因?yàn)閷游鲈诒由线M(jìn)行，所以稱(chēng)為薄層層析。 ② + 百里酚酞 + 中性甲醛 + NaOH 滴，中和了 樣液中氨基酸的羧基與其它酸性物質(zhì)的總 和。 2．特點(diǎn)：適用于發(fā)酵工業(yè)，如發(fā)酵液中含氮量，其發(fā)酵過(guò)程中氮量減少情況等。 三 ． 紫外吸收法 1． 原理：利用蛋白質(zhì)的特有基團(tuán) ， │ R （ — NH— CH— CO） 對(duì)紫外光有吸收作用在 280 nm下，吸光度與蛋白質(zhì)濃度成直線(xiàn)關(guān)系，求含量。 （ 560nm） NH2— CO— NH— CO— NH2 + NH3 NH2— CO— NH2 + NH2— CO— NH2
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1