第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測定第一節(jié)概述(存儲版)
【正文】 液不易澄清透明時，可將凱氏燒瓶冷卻，加入 30％過氧化氫 2— 3 m1 后再繼續(xù)加熱消化 。 二、 微量凱氏定氮法 原理及適用范圍同前 與常量法不同點： 加入硼酸量 有 50 ml 10 ml, 滴定用鹽酸濃度由 mol/L mol/L , 可用微量滴定管。 1. 原理 脲 （ 尿素 ） NH2— CO— NH2 加熱至 150~160℃ 時 ，兩分子縮和成雙縮脲 。 三 ． 紫外吸收法 1． 原理：利用蛋白質(zhì)的特有基團 ， │ R （ — NH— CH— CO） 對紫外光有吸收作用在 280 nm下，吸光度與蛋白質(zhì)濃度成直線關(guān)系，求含量。 ② + 百里酚酞 + 中性甲醛 + NaOH 滴，中和了 樣液中氨基酸的羧基與其它酸性物質(zhì)的總 和。 ? Rf = a / b a b 樣點 溶劑前沿 點樣原點 ? 優(yōu)點： ① 展開時間短，一般在 20— 30分鐘，展開距離通常只需 10 cm，且分離效果好。 （三）操作方法： ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點樣：距薄板底端 2cm處，用針畫一標(biāo)記作為 原點。 ：主要是低沸點的 2～ 3種有機溶劑組成的溶劑系統(tǒng) ， 分離效果主要決定于展開劑的選擇 ， 因為吸附劑在一定情況下是恒定的 ，吸附劑的選擇余地遠遠小于展開劑的選擇 。 ，在紫外光下觀察斑點。 2. 雙縮脲法測定原理。 ： 例：日本島津 CS—— 910 型雙波長薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀： 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產(chǎn) 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國 Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀（日本日立公司，帶紫外檢測器、記錄器和自動收集器，制備量可達 10g 。 ： 上行法 、 下行法 、 雙向展開 、 單向多次展開 、 雙向多次展開 。 ， 下端浸入展開劑 1cm， 千萬別讓溶劑浸過了樣點 。 ? 缺點： Rf值重現(xiàn)性比紙上層析差 。 （一）原理： 取一定量經(jīng)水解的樣品溶液，滴在制好的薄層板上，在溶劑系統(tǒng)中進行雙向上行法展開， 樣品各組分在薄層板上經(jīng)過多次的被吸附、解吸、交換等作用，同一物質(zhì)具有相同的 Rf值，不同成分則有不同的 Rf值，因而各種混合物可達到彼此被分離的目的。 ② %百里酚酞乙醇溶液， ③ %中性紅 50%乙醇溶液， ④ mol/L 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。 本法亦適用于豆類 、 油料 、 米谷等作物種子及肉類等樣品測定 。 北京福德泰和科技有限公司 產(chǎn)品名稱： 凱氏定氮儀 二、雙縮脲法 傳統(tǒng)的凱氏定氮法應(yīng)用范圍廣 ， 靈敏度高 、 準(zhǔn)確 ， 不要大儀器 ， 但費時間 ， 有環(huán)境污染 。 氫氧化銅在 70～ 90℃ 時發(fā)黑。 ③ 消化時應(yīng)注意不時轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁
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