第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測定第一節(jié)概述-文庫吧在線文庫
【正文】 上的固體殘渣洗下，并促進其消化完全。 指示劑 紅色 綠色 紅色 （酸） （堿） （酸） 2 用過量的 H2SO4 或 HCl 標準溶液吸收，再用 NaOH 標準溶液滴定過剩的酸液，用甲基紅指示劑。也可加入硫酸鈉，氯化鉀等提 高沸點，但效果不如硫酸鉀。 ?一些蛋白質(zhì)的含氮量 一般為 15%~ %，有的上下浮動 可以測出總氮 N 一、 凱氏定氮法 由 Kieldhl于 1833年提出，現(xiàn)發(fā)展為常量、微量、自動定氮儀法，半微量法及改良凱氏法。 具體測定方法： 凱氏定氮法 —— 最常用的 ， 國內(nèi)外應(yīng)用普遍 。 某些蛋白質(zhì)中還含有微量的 P、 Cu、 Fe、 I 等 。這里也包括非蛋白的氮，所以只能稱為粗蛋白的含量（但馬鈴薯等非蛋白氮多的要單測）。 有多種氨基酸分析儀。 然后加堿蒸餾 ， 使氨蒸出 。還可以加氧化汞、汞（均有毒，價格貴）、硒粉、二氧化鈦。 加 30毫升 4 mol/L氫氧化鈉 （ 或氫氧化鉀 ） 溶液 ， 必要時過濾 ， 并存于玻璃瓶中蓋緊口 。 ⑥ 若取樣量較大，如干試樣超過 5 g 可按每克試樣 5 m1的比例增加硫酸用量。 蒸餾裝置見 159 頁圖 102 。 雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)和物 ， 這種反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng) 。 2．適用范圍：常用于生物化學工作，因為干擾因素多，故在食品分析領(lǐng)域應(yīng)用不廣泛。 二者之差可計算氨基酸含量 （二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定條件下與茚三酮起反應(yīng)，生成藍紫色化合物，可比色定量。 ② 層析后得到的斑點小而清晰。再以點樣距扳子寬窄可點幾個點同時 展開，點與點之間間隔 1～ 2cm。 ： Ⅰ .微量圓環(huán)法 。 。 3. 氨基酸總量的測定方法（甲醛滴定法）。 ， 定容 ， 離心 ， 比色 。 ? 有機溶劑極性由小到大為： 石油醚 、 環(huán)己烷 、 四氯化碳 、 三氯乙烷 、 甲苯 、苯 、 二氯甲烷 、 氯仿 、 乙醚 、 乙酸乙酯 、 丙酮 、正丙醇 、 乙醇 、 甲醇 、 水 、 吡啶 、 有機酸類等 。 ④ 展開：點樣完了 ， 放入密閉容器中 （ 展開槽 ） ， 傾斜一定角度 10～ 30176。 ⑤ 也可用于大量分離＞ 500 mg，作為樣品制備層析。它的應(yīng)用范圍比紙上層析更廣泛，常用來分析氨基酸、農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素等。（適于食品中游離氨基酸的測定） 3．雙指示劑： ① 40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示劑，用 氫氧化鈉將 40%甲醛中和至藍色。樣品不用消化 2. 方法特點及應(yīng)用范圍 本法靈敏度較低 ， 但操作簡單快速 ， 故在生物化學領(lǐng)域中測定蛋白質(zhì)含量時常用此法 ?？捎嬎憧偟俜趾坎⒂涗?， 12分鐘完成 1個樣。 ⑨ 蒸餾前若加堿量不足，消化液呈藍色不生成氫氧化銅沉淀，此時需再增加氫氧化鈉用量。 ② 消化時不要用強火 ， 應(yīng)保持和緩沸騰 ， 以免粘貼在凱氏瓶內(nèi)壁上的
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