第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測定第一節(jié)概述-閱讀頁
2024-10-31 11:38本頁面
【正文】 ： 分光光度計 ， 離心機 （ 4000 r/min） 4. 試劑： (1) 堿性硫酸銅溶液 (2) 四氯化碳 5．操作方法：采用凱氏法測出的蛋白質(zhì)樣品為標準樣繪標準曲線 。 2．適用范圍：常用于生物化學(xué)工作，因為干擾因素多，故在食品分析領(lǐng)域應(yīng)用不廣泛。 第六節(jié) 氨基酸定量測定 一．氨基酸的一般定量測定 （一）甲醛滴定法 ：氨基酸本身有堿性 — NH2— 基，又有 酸性 — COOH 基，成中性內(nèi)鹽，加入甲醛 溶液后，與 — NH2— 結(jié)合，堿性消失，再用強堿來滴定 — COOH 基。（適于食品中游離氨基酸的測定） 3．雙指示劑： ① 40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示劑，用 氫氧化鈉將 40%甲醛中和至藍色。 4．操作：同時取兩份樣： ① + 中性紅指示劑，用氫氧化鈉直接滴，中和 樣液中其它酸性物質(zhì)。 二者之差可計算氨基酸含量 （二）茚三酮的比色法 原理：氨基酸在一定條件下與茚三酮起反應(yīng)，生成藍紫色化合物，可比色定量。 第七節(jié) 氨基酸的分離與測定 一．薄層色譜法（薄層層析法（ TLC 法） Thin Layer Chromatography 簡介： 近年來發(fā)展起來的一種微量而快速的層析方法，它把吸附劑或支持劑均勻的鋪在玻璃板上成一薄層，把樣品點在薄層上，然后用合適的溶劑展開，從而達到分離、鑒定和定量的目的。它的應(yīng)用范圍比紙上層析更廣泛，常用來分析氨基酸、農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素等。然后用茚三酮顯色，與標準氨基酸進行對比，鑒別各種氨基酸種類，從顯色斑點顏色的深淺可以大致確定其含量。 ② 層析后得到的斑點小而清晰。 ④ 點樣量少，靈敏度高。 ⑤ 也可用于大量分離＞ 500 mg，作為樣品制備層析。 ? 分類：按層析的原理可分為：吸附 、 分配 、離子交換 、 凝膠等 。再以點樣距扳子寬窄可點幾個點同時 展開，點與點之間間隔 1～ 2cm。注 意要等一個點干了再點另一個點。 ④ 展開：點樣完了 ， 放入密閉容器中 （ 展開槽 ） ， 傾斜一定角度 10～ 30176。 到離頂端一部分 ， 取出樣板 、 晾干 、 顯色 。 ： Ⅰ .微量圓環(huán)法 。 Ⅲ .圖解法： 樣品極性小 ， 選吸附劑活性高 ， 展開劑極性低的 。 ? 有機溶劑極性由小到大為： 石油醚 、 環(huán)己烷 、 四氯化碳 、 三氯乙烷 、 甲苯 、苯 、 二氯甲烷 、 氯仿 、 乙醚 、 乙酸乙酯 、 丙酮 、正丙醇 、 乙醇 、 甲醇 、 水 、 吡啶 、 有機酸類等 。 雙向展開： ⑤ 顯色： ，使斑點顯色，即噴霧顯色。 。 定量： ：以標準斑點對照 ， 相當于樣品斑點中含量 ug數(shù) 。 ， 定容 ， 離心 ， 比色 。 二 ． 氨基酸自動分析儀法 三 ． 氣相色譜法 四 ． 高效液相色譜法 103 第十章的重點 1. 凱氏定氮法原理、分步、測定方法。 3. 氨基酸總量的測定方法（甲醛滴定法）。
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