熒光定量pcr的原理及臨床應(yīng)用2學(xué)生講課hcmv-文庫(kù)吧資料
2025-01-12 08:24本頁(yè)面
【正文】 …… CCTGAGCTGTGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 擴(kuò)增 加入 dUTP 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ ’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 潛在氣溶膠污染物 50℃ 2min 加入 UNG酶 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 ? 乙型肝炎病毒 DNA(HBVDNA) ? EB病毒 DNA(EBVDNA) ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA(HCMVDNA) ? 肺炎支原體 DNA(MPDNA) ? 肺炎衣原體 DNA(CPDNA) 臨床標(biāo)本的采集 檢 測(cè) 項(xiàng) 目 標(biāo) 本 類 型 及 要 求 HBVDNA 血清或者血漿 100μl(不可用肝素抗凝 ) EBVDNA 血清 100μl或抗凝全血 1ml(不可用肝素抗凝 ) HCMVDNA 血清 100μl或抗凝全血 1ml (不可用肝素抗凝 ) MPDNA CPDNA 咽拭子、痰液或肺支氣管灌洗液 1ml 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測(cè)試劑盒 ? 用于器官移植、骨髓移植及 HIV陽(yáng)性/AIDS患者人巨細(xì)胞病毒感染的 輔助診斷和療效監(jiān)控 。 ? TaqMan法 特異性高 ， 重復(fù)性好 ， 價(jià)格適中 ，可以滿足臨床上檢測(cè)特定項(xiàng)目的要求。所以，反應(yīng)中發(fā)出的熒光信號(hào)與擴(kuò)增產(chǎn)生的 DNA雙鏈的量成正比。 F Q 10nm F Fluorophore,熒光基團(tuán) Q Quencher，淬滅基團(tuán) F Q 10nm 熒光共振能量轉(zhuǎn)移（ FRET）發(fā)生的條件 ? 熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)都能發(fā)射熒光 ? 熒光基團(tuán)的 發(fā)射光譜 和淬滅基團(tuán)的 激發(fā)光譜 需有效重疊 ? 熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)應(yīng)足夠的近（ 10nm） 波長(zhǎng) 信 號(hào) 強(qiáng) 度 常見的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR ? TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR ? 分子信標(biāo)探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR ? 雙鏈 DNA交聯(lián)熒光染料法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR ? 雙雜交探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR ? 蝎形探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 探針的熒光標(biāo)記 ? 探針在其 5’端標(biāo)記一個(gè) 熒光基團(tuán) ，如 6羧基熒光素 (FAM)、四氯 6羧基熒光素 (TET)、六氯 6羧基熒光素 (HEX)等 ? 探針在其 3’端標(biāo)記一個(gè) 淬滅基團(tuán) ，如 6羧基 四甲基羅丹明 (TAMRA) TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 引物延伸所用到的DNA聚合
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