熒光定量pcr的原理及臨床應(yīng)用2學(xué)生講課hcmv(存儲(chǔ)版)
【正文】 aq酶的發(fā)現(xiàn) ? 美國(guó)的嗜熱菌研究室在黃石國(guó)家公園溫泉中發(fā)現(xiàn)了嗜熱菌 (Thermus aquaticus)株， Cetus公司研究人員從中分離了 Taq DNA聚合酶 ? 特點(diǎn)：①耐高溫： 70℃ 2h 活性 90%， 93℃ 2h 活性 60%， 95℃ 2h 活性 40% ； ②延伸溫度較高 (一般為 72 ℃ )：大大 提高了擴(kuò)增特異性、靈敏性和擴(kuò)增效率 。 ? 熒光定量 PCR的擴(kuò)增和產(chǎn)物分析過(guò)程是同時(shí)完成 的，而且在 封閉 的反應(yīng)體系中進(jìn)行，比較安全，易于處理。 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 氣溶膠污染物 50℃ 2min， 95℃ 滅活 加入U(xiǎn)NG酶 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 擴(kuò)增 加入 dUTP 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ ’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 潛在氣溶膠污染物 50℃ 2min 加入 UNG酶 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 5’… 斷裂的核苷酸片段 …3’ 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 ? 乙型肝炎病毒 DNA(HBVDNA) ? EB病毒 DNA(EBVDNA) ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA(HCMVDNA) ? 肺炎支原體 DNA(MPDNA) ? 肺炎衣原體 DNA(CPDNA) 臨床標(biāo)本的采集 檢 測(cè) 項(xiàng) 目 標(biāo) 本 類(lèi) 型 及 要 求 HBVDNA 血清或者血漿 100μl(不可用肝素抗凝 ) EBVDNA 血清 100μl或抗凝全血 1ml(不可用肝素抗凝 ) HCMVDNA 血清 100μl或抗凝全血 1ml (不可用肝素抗凝 ) MPDNA CPDNA 咽拭子、痰液或肺支氣管灌洗液 1ml 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測(cè)試劑盒 ? 用于器官移植、骨髓移植及 HIV陽(yáng)性/AIDS患者人巨細(xì)胞病毒感染的 輔助診斷和療效監(jiān)控 。 。 ? DNP在純水或者 1~2M的 Nacl溶解度較大，在，而 RNP溶解度較大，因此 利用 RNP和 DNP。 ? TaqMan法 特異性高 ， 重復(fù)性好 ， 價(jià)格適中 ，可以滿足臨床上檢測(cè)特定項(xiàng)目的要求。 ? 熒光定量 PCR通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光值的變化，體現(xiàn)每一個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，分析結(jié)果為 定量 結(jié)果。 ? Klenow酶不耐高溫， 90℃ 加熱后會(huì) 變性失活 ，每次循環(huán)結(jié)束都要加入新鮮的酶。 ? 由美國(guó) PE公司遺傳部的 Dr.
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