熒光定量pcr的原理及臨床應(yīng)用2學(xué)生講課hcmv(已修改)
2025-01-18 08:24 本頁面
【正文】 熒光定量 PCR的原理及臨床應(yīng)用 蘇曉霽 如何做一個(gè)“ 聰明 ”的實(shí)習(xí)生 ? 實(shí)習(xí)的目的就是對在校所學(xué)的理論知識和實(shí)驗(yàn)技能，在臨床的實(shí)際工作中進(jìn)行實(shí)踐、鞏固和提高。 ? 如何做到： ①實(shí)習(xí)之前要復(fù)習(xí)理論知識和實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容 “ 理論先行 ” ②實(shí)習(xí)過程中要“ 聰明 ” ③做好實(shí)習(xí)筆記，用心思考， 實(shí)習(xí)之外下功夫 如何做一個(gè)“聰明”的實(shí)習(xí)生 聰 明 耳：認(rèn)真聽老師的說明和講解 看：仔細(xì)看老師的操作 問：有疑問要多提問，多討論 心：要用心去思考 日月：要每天每月堅(jiān)持做到 內(nèi)容概要 ? PCR的定義和原理 ?熒光定量 PCR的原理和分類 ?熒光定量 PCR結(jié)果的分析 ?熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 PCR的定義 ? PCR是 Polymerase Chain Reaction的縮寫，中文稱為 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ，由 變性 、 退火 及 延伸 幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期 ,循環(huán)進(jìn)行 ,可使目的 DNA得以迅速擴(kuò)增。 ? 由美國 PE公司遺傳部的 Dr. Mullis發(fā)明，由于PCR技術(shù)的跨時(shí)代意義， Mullis獲得了 1993年諾貝爾化學(xué)獎。 PCR的原理 ? 變性 ：雙鏈 DNA在高溫下解開成單鏈的過程 。溫度一般為 95℃ 左右。 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG …… GGACTCGACACT…5’ 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG …… GGACTCGACACT…5’ 加熱 PCR的原理 ? 退火 ：溫度下降后，兩條配對的單鏈 DNA重新結(jié)合為雙鏈的過程。溫度一般為 50~60℃ 。 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG ……GGACTCGACACT…5’ CCACTGCCTCTC GGACTCGACACT 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG ……GGACTCGACACT…5’ CCACTGCCTCTC GGACTCGACACT 降溫 PCR的原理 ? 延伸 ： DNA聚合酶催化以引物為起始點(diǎn)的 DNA鏈延伸反應(yīng) 。溫度一般為 72℃ 左右。 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG …… GGACTCGACACT…5’ CCACTGCCTCTC GGACTCGACACT 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 3’…GGTGACGGAGAG …… GGACTCGACACT…5’ CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA GGTGACGGAGAG …… GGACTCGACACT 恒溫 普通 PCR的原理 普通 PCR的原理 ? PCR反應(yīng)成分： DNA (Taq酶 ) 、 Mg2+等 （熒光定量 PCR） Taq酶的發(fā)現(xiàn) ? 在 Taq酶發(fā)現(xiàn)之前，實(shí)驗(yàn)室的 PCR反應(yīng)中運(yùn)用的是大腸桿菌 DNA聚合酶 Ι的 Klenow片段。 ? Klenow酶不耐高溫， 90℃ 加熱后會 變性失活 ，每次循環(huán)結(jié)束都要加入新鮮的酶。 ? 而且 DNA的延伸是在 37℃ 完成，模板和引物容易錯配，造成反應(yīng)的
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