熒光原位雜技技術(shù)及其臨床應(yīng)用李宇中(已修改)
2025-06-07 18:19 本頁面
【正文】 熒光原位雜交技術(shù)及其臨床應(yīng)用 熒光原位雜交 （ FISH） 將分子帶進(jìn)細(xì)胞遺傳學(xué)的領(lǐng)域 熒光原位雜交技術(shù) 90 年代以后 , 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高以及向各學(xué)科的滲透 , 出現(xiàn)了一種新的運用分子手段分析染色體異常的方法 , 即 : 染色體熒光原位雜交 ( FISH) 技術(shù) , 該技術(shù)不僅可用于中期分裂相 , 還可在間期細(xì)胞顯示雜交信號 , 尤其適用于那些培養(yǎng)難以成功的各種組織細(xì)胞。 由細(xì)胞到 DNA分子 熒光原位雜交技術(shù)的基本概念 (DNA)分子 (DNA)探針 (DNA)變性 (DNA)雜交 熒光原位雜交原理 FISH的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸 為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未 知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測的 雜交雙鏈核酸。 熒光原位雜交技術(shù) 熒光原位雜交技術(shù)（ 簡稱 FISH）是用細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的原理，通過熒光標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞內(nèi)的核酸序列雜交。借助熒光顯微鏡，在細(xì)胞和（或）組織中觀察并分析細(xì)胞內(nèi)雜交于靶序列的多種彩色探針信號，以獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息。 熒光原位雜交示意圖 常見的熒色物 熒色物 激發(fā)（ nm） 散發(fā)（ nm） DAPI 達(dá)比 350 470 FITC 異氰酸熒光素 490 525 Texas Red 德克莎斯紅顏料 596 615 熒光顯微鏡系統(tǒng) 探針的標(biāo)記的種類及比較 ： （ 1）直接標(biāo)記法，就是熒光素通過一些方法直接連接到核酸序列上。 （ 2）間接標(biāo)記法，就是把地高辛或生物素等半抗原連接到核酸序列 ，然后在雜交過后的檢測階段，加入標(biāo)記有熒光素的相應(yīng)半抗原抗體參與反應(yīng)進(jìn)行檢測。 探針的標(biāo)記的種類及比較 2. 這兩種標(biāo)記方法相比較而言各有利弊。直接法方便、快捷且背景低，信號強度不及間接法強；間接法具有信號放大系統(tǒng)，信號強檢測靈敏度高，但是間接法雜交過后檢測步驟繁瑣，背景信號強。近年來熒光的亮度和抗淬滅性的不斷改進(jìn)和提高 , 直接標(biāo)記的熒光探針越來越成為首選 , 并采用多種不同顏色的熒光 , 方便在同一標(biāo)本上同時檢測多種異常 . 其熒光強度和信號大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察 , 操作過程中也不需要嚴(yán)格避光 , 鑒于直接標(biāo)記法已經(jīng)可以獲得較滿意的信號，目前臨床檢測用的探針多為直接標(biāo)記法標(biāo)記。 臨床常用的探針 臨床使用的探針都是以 DNA 為主。 常用探針主要有： （ 1）著絲粒探針。 CEP:Chromosome Enumeration DNA Probes （ 2）位點特異型探針。 LSI :Locus specific identifier （ 3）染色體涂染探針。 WCP: Whole Chromosome Paints 著絲粒 探針 a. 高度重復(fù)序列 DNA ,重復(fù)數(shù)百次至數(shù)千次，其靶
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