pcr技術及其應用(已修改)
2025-08-16 22:46 本頁面
【正文】 生物化學實驗技術 目 錄 PCR的反應原理 PCR的類型和應用 PCR示例 多聚酶鏈式反應 （ PCR： Polymerase Chain Reaction) Kary B. Mullis PCR是由美國科學家 穆利斯提出的一種 體外簡化條件下模擬 DNA體內(nèi)復制的 DNA 快速擴增的方法，此技術獲得 1993年諾貝 爾化學獎。 體內(nèi) DNA的復制體系 DNA聚合酶 （ I II III） 拓撲異構酶 解旋酶類 SSB 引物 dNTP Mg2+ 5’ 3’ Mullis的 PCR構思 引物 引物 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定 DNA片段 Taq DNA聚合酶（ thermus aquaticus) 酶活性(%) 溫度 (℃ ) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 耐熱 DNA聚合酶 Saiki（ 1988）將耐熱 DNA聚合酶引入 PCR，使利用熱變性解鏈 DNA模板可行。 PCR反應循環(huán) 72℃ 94℃ 55℃ PCR循環(huán) 變性 退火 延伸 PCR的指數(shù)擴增（ 2n） 引物 延伸 延伸 5’ 5’ 3’ 3’ 變性、退火 變性、退火 變性、退火 延伸 Taq P1 P2 PCR反應體系 dATP dTTP dGTP dCTP Mg2+ 模板： DNA 引物： P1 +P2 DNA聚合酶： TaqE 原料： dNTP 反應緩沖液 10xBuffer 輔助因子： Mg2+ 1） PCR反應成分 （ 1）模板 單、雙鏈 DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、 DNA聚合酶抑制劑、 DNA結合蛋白類。 DNA模板一般 100ng /100?L。 模板濃度過高會導致反應的非特異性增加。 PCR反應條件 （ 2）引物濃度 ?mol/L 濃度過高易導致模板與引物錯配 ,反應特異性下降。 （ 3） Taq DNA聚合酶 U/50 ?l 酶量增
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