pcr技術(shù)及其應(yīng)用(已修改)
2025-08-16 22:46 本頁面
【正文】 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 目 錄 PCR的反應(yīng)原理 PCR的類型和應(yīng)用 PCR示例 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （ PCR： Polymerase Chain Reaction) Kary B. Mullis PCR是由美國科學(xué)家 穆利斯提出的一種 體外簡(jiǎn)化條件下模擬 DNA體內(nèi)復(fù)制的 DNA 快速擴(kuò)增的方法，此技術(shù)獲得 1993年諾貝 爾化學(xué)獎(jiǎng)。 體內(nèi) DNA的復(fù)制體系 DNA聚合酶 （ I II III） 拓?fù)洚悩?gòu)酶 解旋酶類 SSB 引物 dNTP Mg2+ 5’ 3’ Mullis的 PCR構(gòu)思 引物 引物 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定 DNA片段 Taq DNA聚合酶（ thermus aquaticus) 酶活性(%) 溫度 (℃ ) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20 耐熱 DNA聚合酶 Saiki（ 1988）將耐熱 DNA聚合酶引入 PCR，使利用熱變性解鏈 DNA模板可行。 PCR反應(yīng)循環(huán) 72℃ 94℃ 55℃ PCR循環(huán) 變性 退火 延伸 PCR的指數(shù)擴(kuò)增（ 2n） 引物 延伸 延伸 5’ 5’ 3’ 3’ 變性、退火 變性、退火 變性、退火 延伸 Taq P1 P2 PCR反應(yīng)體系 dATP dTTP dGTP dCTP Mg2+ 模板： DNA 引物： P1 +P2 DNA聚合酶： TaqE 原料： dNTP 反應(yīng)緩沖液 10xBuffer 輔助因子： Mg2+ 1） PCR反應(yīng)成分 （ 1）模板 單、雙鏈 DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、 DNA聚合酶抑制劑、 DNA結(jié)合蛋白類。 DNA模板一般 100ng /100?L。 模板濃度過高會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)的非特異性增加。 PCR反應(yīng)條件 （ 2）引物濃度 ?mol/L 濃度過高易導(dǎo)致模板與引物錯(cuò)配 ,反應(yīng)特異性下降。 （ 3） Taq DNA聚合酶 U/50 ?l 酶量增
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