熒光定量pcr技術(shù)講座-文庫吧資料
2025-05-09 18:46本頁面
【正文】 文獻(xiàn)檢索 實(shí)驗(yàn)篩選 選擇多個(gè)備選內(nèi)參基因，以備選內(nèi)參基因的幾何平均數(shù)作為均一化標(biāo)準(zhǔn) 內(nèi)參基因Housekeeping Gene RNA抽提、反轉(zhuǎn)錄為 cDNA的效率不同，用于定量分析的樣本初始濃度不同。 SYBR Green I 工作原理 Taqman 工作原理 在退火過程中，探針與靶序列結(jié)合 探針被 Taq酶的 5’ 3’ 外切酶活性剪切成片斷 游離報(bào)告基團(tuán)發(fā)出熒光 在延伸過程中，探針部分與靶序列分離 熒光信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合探針的 DNA分子成正比。 ? SYBR Green I只與雙鏈 DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光。 成熟 miRNA qPCR檢測 – 莖環(huán)法 優(yōu)點(diǎn)：特異引物逆轉(zhuǎn)錄，理論上效率更高，檢測更靈敏 缺點(diǎn)：莖環(huán)引物設(shè)計(jì)復(fù)雜；特異引物逆轉(zhuǎn)錄不便多基因檢測 檢測方法選擇 ? 依樣本特性，檢測目標(biāo)多寡而定 ? 康為技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)舉例： – 復(fù)旦大學(xué)某客戶 ? miRNA芯片提示 10個(gè) miRNA在病人與正常人之間有顯著差異表達(dá) ? 要求從 66個(gè)外周血 RNA樣本中檢測這 10個(gè) miRNA ? 加尾法 ， 5個(gè)目標(biāo)獲得良好檢測 ? 莖環(huán)法， 4個(gè)目標(biāo)獲得良好檢測 ? 1個(gè)目標(biāo)的檢測很難，嘗試多種引物設(shè)計(jì)，調(diào)整反應(yīng)體系 康為 miRNA產(chǎn)品 小 RNA提取試劑盒 加尾法 miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒 miRNA熒光定量 PCR檢測試劑盒 CW0627 CW2141 CW2142 康為 miRNA檢測服務(wù) 全套 miRNA檢測：從生物樣本到數(shù)據(jù) 莖環(huán)法 miRNA檢測引物：定制 (Real time Quantitative PCR) ?miRNA的特點(diǎn)及檢測 ?熒光定量 PCR檢測 內(nèi) 容 PCR： 偉大的天才發(fā)明 ? Use of LSD ? Synthesis and selftesting of novel psychoactive substances ? Belief in astrology C Y C L E N U M B E R A M O U N T O F D N A0 11 22 43 84 165 326 647 1288 2569 51210 1 , 0 2 411 2 , 0 4 812 4 , 0 9 613 8 , 1 9 214 1 6 , 3 8 415 3 2 , 7 6 816 6 5 , 5 3 617 1 3 1 , 0 7 218 2 6 2 , 1 4 419 5 2 4 , 2 8 820 1 , 0 4 8 , 5 7 621 2 , 0 9 7 , 1 5 222 4 , 1 9 4 , 3 0 423 8 , 3 8 8 , 6 0 824 1 6 , 7 7 7 , 2 1 625 3 3 , 5 5 4 , 4 3 226 6 7 , 1 0 8 , 8 6 427 1 3 4 , 2 1 7 , 7 2 828 2 6 8 , 4 3 5 , 4 5 629 5 3 6 , 8 7 0 , 9 1 230 1 , 0 7 3 , 7 4 1 , 8 2 431 1 , 4 0 0 , 0 0 0 , 0 0 032 1 , 5 0 0 , 0 0 0 , 0 0 033 1 , 5 5 0 , 0 0 0 , 0 0 034 1 , 5 8 0 , 0 0 0 , 0 0 0PCR：理想與現(xiàn)實(shí) 起點(diǎn)定量 終點(diǎn)定量 ? 起點(diǎn)定量檢測 ： 起點(diǎn)量是樣本中未經(jīng) PCR放大 之前的模板量 具有重現(xiàn)性，誤差小
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