熒光定量pcr的原理及臨床應(yīng)用2學(xué)生講課hcmv(文件)
【正文】 5min 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 巨細(xì)胞病毒 DNA的提取（尿液和乳汁） 1ml尿液或乳汁 去除上清液，保留沉淀 12022rpm，5min 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。蛞汉腿橹? 加入50μl DNA提取液 劇烈振蕩混勻 510s 100℃加熱10min 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。蛞汉腿橹? 4℃ 放置或用于 PCR 振蕩混勻5~10s 12022rpm，5min 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。馨图?xì)胞的提?。? 1ml抗凝全血 1ml生理鹽水 細(xì)胞分離液 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA的提取（淋巴細(xì)胞的提?。? 水平離心機(jī)2500rpm， 15min 淋巴細(xì)胞層 吸取淋巴細(xì)胞懸液 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。馨图?xì)胞的提取） 淋巴細(xì)胞懸液 去除上清液，保留沉淀 12022rpm，5min 人巨細(xì)胞病毒 DNA定量檢測試劑盒 ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。馨图?xì)胞的提取） 加入50μl DNA提取液 劇烈振蕩混勻 510s 100℃加熱10min 人巨細(xì)胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細(xì)胞病毒 DNA的提?。馨图?xì)胞的提?。? 4℃ 放置或用于 PCR 振蕩混勻5~10s 12022rpm，5min 熒光定量 PCR擴(kuò)增過程 50℃ 94℃ 2min 5min 93℃ 15s 57℃ 30s Stage1 Stage2 Stage3 45 1 1 25℃ 1min Stage4 1 DNA濃縮液的作用 ? DNA濃縮液的成分： PEG6000、 NaCl ? PEG（聚乙二醇）的作用： PEG與自由水分子結(jié)合，同時蛋白質(zhì)表面的水化膜被奪走，與水分子結(jié)合的極性集團(tuán)轉(zhuǎn)而與多聚物的氧原子或者氫氧根結(jié)合，形成蛋白質(zhì)與多聚物的復(fù)合體，從溶液中沉淀析出。 ? DNP在純水或者 1~2M的 Nacl溶解度較大，在，而 RNP溶解度較大，因此 利用 RNP和 DNP。 ？問？題？ ? PCR的中文名稱，一般包括哪幾個反應(yīng)過程？ ? 在 PCR中我們常用到的酶是什么？有什么優(yōu)點(diǎn)？ ? 熒光共振能量轉(zhuǎn)移的原理？ ? 有效防止和消除氣溶膠污染的方法？ ? 在臨床血液標(biāo)本采集中哪種抗凝劑不能使用？ ? 淋巴細(xì)胞分離液的作用原理？ 。 。 ? PEG的濃度與沉淀出的 DNA片段大小成反比。 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 氣溶膠污染物 50℃ 2min， 95℃ 滅活 加入UNG酶 熒光定量 PCR在臨床的應(yīng)用 5’…CCACTGCCTCTC …… CCTGAGCTGTGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 擴(kuò)增 加入 dUTP 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ ’…CCAC UGCCUCUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC UGAGCUGUGA…3’ 5’…CCAC UGCC CUC …… CC
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