氨基酸與蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)(參考版)
2025-05-10 18:01本頁面
【正文】 ? 病因：血紅蛋白 AA順序的細(xì)微變化 ? 正常人 HbA—?N6Glu ? 病 人 HbS—?N6Val 鐮刀型血紅蛋白分子 鐮刀狀細(xì)胞血紅蛋白的治療性矯正 ? CH3 ? CH3 CHCHC + N C O NH3+ O CH3 CH3 CHCHC NH C NH2 O O N末端纈氨酸殘基 氰酸鉀 （ KCNO） 治療 。 系統(tǒng)樹 ——說明物種之間進(jìn)化關(guān)系的圖解 五、血紅蛋白分子?。?54） ? 分子病 —指蛋白質(zhì)分子中由于 AA排列順序與正常蛋白質(zhì)不同而發(fā)生的一種遺傳病 (基因突變造成的 )。 作用：傳遞電子，即 Fe3+ + e Fe2+ 血紅素結(jié)合部位 酶結(jié)合部位 一條鏈 (104Aa)+鐵卟啉 Fe3+ + e Fe2+ 通過植物、動物和微生物等數(shù)百種生物的細(xì)胞色素 C一級結(jié)構(gòu)的研究表明： （ 1）親緣關(guān)系越近， AA順序的同源性越大。 同源蛋白質(zhì)含有 不變殘基 和 可變殘基 。 ? 利用 兩套或多套肽段 的氨基酸順序彼此間的交錯重疊， 拼湊 出整條多肽鏈的氨基酸順序 。此法的特點(diǎn)是能夠不斷重復(fù)循環(huán)，將肽鏈 N端氨基酸殘基逐一進(jìn)行標(biāo)記和解離。 N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 1 化學(xué)法： (Cyanogen bromide) ?溴化氰水解法，它能選擇性地切割由 甲硫氨酸 的羧基所形成的肽鍵。 N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 1水解位點(diǎn) 1)胰蛋白酶 2) 糜蛋白酶 專一性 ﹤ 胰蛋白酶 斷裂 Phe,Trp,Tyr等芳香族 AA的羧基所形成的肽鍵 斷裂鍵鄰近的基團(tuán) 堿性：裂解能力 ↑ 酸性：裂解能力 ↓ N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 13）胃蛋白酶 專一性＝糜蛋白酶 要求被斷裂鍵兩側(cè)的殘基都是疏水性 AA 如 phePhe 最適 pH2。 （一）N末端分析法 ? 二硝基氟苯（ DNFB） 法 O2 N FN O 2+ H 2 N C H CR OH N C H CR OO 2 NN O 2H+H 2 OO 2 NN O 2H N C H CR OO H + 氨基酸D N F B N 端氨基酸 DNP 衍生物D N P 氨基酸是游離氨基酸、多肽及蛋白共有的一個反應(yīng) 用途 ： 可以用來鑒定多肽或蛋白質(zhì) NH2末端氨基酸 . DNS + AA 多肽 蛋白 弱堿 DNS AA 多肽 蛋白 酸 DNSAA +游離 AA （乙醚抽提，有熒光） ? 丹磺酰氯法 (二 ) 二硫鍵的斷裂 ? 在可用 8mol/L尿素或 6mol/L鹽酸胍（使蛋白變性，亞基分開）存在下， 使 用過量的 ?巰基乙醇 ，使二硫鍵還原為巰基，然后用 烷基化試劑 保護(hù)生成的巰基，以防止它重新被氧化 。 ? 酸解，得黃色 DNP氨基酸，用乙醚抽提分離。 ? 前提： 樣品均一、純度 97%以上、已知分子量 F. Sanger (1953, Cambridge U) Insulin 胰島素 (A, B chains) 以 傳統(tǒng)氨基酸定序法決定蛋白質(zhì) 序列 S S S S S S +NH3 NH3+ OOC Q G I V E Q C C T S I C S L Y L E N Y C N COO F S F V N Q H L C G H L V E A L Y L V C G E R G F Y T P K T Bchain Achain 一級結(jié)構(gòu) (Primary structure) ● 如何定出 一級結(jié)構(gòu) ： 蛋白質(zhì)的氨基酸順序 (1)直接測定 氨基酸測序 ： Edman degradation F. Sanger (Cambridge U.) → Insulin 胰島素 (A, B chains) (2) 由 cDNA 序列反推 氨基酸 序列： 一）、 Edman degradation降解法測定氨基酸順序的一般測定步驟 ? （ 1） 測定多肽鏈的數(shù)目，拆分多肽鏈， 分析多肽鏈的 N末端和 C末端殘基 ? （ 2）斷裂多肽鏈內(nèi)、間的二硫鍵 ? （ 3） 測定每條多肽鏈的 AA組成
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