氨基酸與蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)-文庫吧資料
2025-05-13 18:01本頁面
【正文】 ? （ 4） 多肽鏈斷裂成小肽段 （ 5） 測定各個(gè)肽段的 AA順序 ? （ 6） 確定肽段在多肽鏈中的次序 （ 7） 確定原多肽鏈中二硫鍵的位置 ? Sanger法。 ? 用已知分子量的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)，則可以估算出不同蛋白質(zhì)的分子量。 ? 蛋白質(zhì)顆粒在電場中移動(dòng)的速度（ v） 取決于電場強(qiáng)度 (E)， 所帶的 凈電荷 (q)以及與 介質(zhì)的摩擦系數(shù) (f， 即顆粒大小及形狀 )。 ? 蛋白質(zhì)有各自的等電點(diǎn)。其它蛋白不被吸引而結(jié)合不上 。 ? 葡聚糖凝膠 G10G200 ? 瓊脂糖凝膠 2B,4B,6B ? 聚丙烯酰胺凝膠 S100－ S600 ■ 凝膠顆粒 小分子進(jìn)入凝膠分子內(nèi)，被滯留 大分子在凝膠顆粒間移動(dòng)，較快流出 溶劑流動(dòng)方向 按分子量從大到小依次流出 問 題 ： 已知下列蛋白的分子量。 ■ 鹽析 Saltingout ： Ionic strength 溶 解 度 Ammonium sulfate Sodium sulfate A little saltingin effect NH4 + SO4 2 = hydrophobic 不同蛋白的溶解度曲線 硫酸銨分級(jí)沉淀 二）凝膠過濾法： 分子量不同 ? 又稱為分子篩層析。 ■ 鹽對(duì)蛋白質(zhì)濃度的影響 ● 鹽溶 Saltingin: 加 少量 鹽 使 蛋白質(zhì)溶解度變大 ● 鹽析 Saltingout: 加 大量 鹽 使 蛋白質(zhì) 由溶液中 沉淀 出來 ■ 蛋白質(zhì) 溶解度 和 pH值及鹽濃度有關(guān) [NaCl](mol/L) pI pH 溶 解 度 蛋白的穩(wěn)定因素： （ 1）帶電層 （ 2）水化層 加入少量鹽：增加帶電層，促進(jìn)溶解。 ■ 溶解度不同 : 反相柱層析； 鹽析 ■ 分子量不同 : 透析； 凝膠過濾法 ■ 所帶電荷不同 : 電泳；離子交換層析 特有的親和力： 親和層析 一）鹽析法： 溶解度不同 ?不同的蛋白質(zhì)溶解度不同。 ? 部分肽中含有 D氨基酸。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為活性肽。 三、天然存在的重要多肽 ? 在生物體中，多肽最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。 一般含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物與 CuSO4堿性溶液都能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成紫紅色或藍(lán)紫色的復(fù)合物。 ? 雙縮脲（ H2NCONHCONH2） 是兩分子的尿素經(jīng)加熱失去一分子 NH3而得到的產(chǎn)物。 這是由于肽中有不對(duì)稱 C原子存在。 末端 ?NH2,? COOH比游離氨基酸的酸堿度降低。 肽的酸堿性質(zhì)主要來自游離末端 ?NH2和游離末端 ?COOH以及側(cè)鏈 R上可解離的基團(tuán)。 這說明它和氨基酸一樣，是以偶極離子形式形成離子晶格而存在的。 ? 方向性： 一條多肽鏈有兩個(gè)末端，自由 ?氨基，稱為氨基端或 N端； 游離 ?羧基，稱為羧基端或 C端。 組成肽鏈的氨基酸單元稱為氨基酸殘基 。 ? (3) Leu、 Ala、 Ser 第三節(jié) 肽（ peptide） ? 一個(gè)氨基酸的羧基與另一個(gè)氨基酸的氨基之間失水形成的酰胺鍵稱為 肽鍵 ，所形成的化合物稱為肽。 ? (1) Val和 Lys。 ? 分離、鑒定 AA混合物的方法。 一）紙層析 ? 固定相： 纖維素上吸附的水 流動(dòng)相：展層溶劑，有機(jī)相 層析時(shí)，混合 AA在兩相中不斷分配， 疏水性強(qiáng)的AA在固定相水中溶解度 較 小，與水的作用力也較小， 隨展層劑的展層（移動(dòng)）也移動(dòng)較遠(yuǎn)距離（遷移率 Rf大）。原理：分配層析。只需測定 N含量， N含量 /16%即為蛋白含量。 AA平均分子量為 110。 ? 酪氨酸的 ?max＝275nm， ? 苯丙氨酸的 ?max＝257nm ? 色氨酸的 ?max＝280nm 補(bǔ)充：含氮量穩(wěn)定 ? 氨基酸的結(jié)構(gòu)通式為 α 氨基酸。 與茚三酮反應(yīng)(28) 用途 ： 常用于氨基酸的定性或定量分析。 ? 中性氨基酸：酸性和堿性基團(tuán)的算術(shù)平均值： pI = (pK’COO + pK’NH2 )/2， pI～ 6 ? ? 酸性氨基酸：兩個(gè)酸性解離基團(tuán)的算術(shù)平均值pI = (pK’COO + pK’RCOO )/2 ， pI～ 2 ? 堿性氨基酸：兩個(gè)酸性解離基團(tuán)的算術(shù)平均值pI = (pK’NH2+ pK’RNH2 )/2 ， pI7 不同 pH值時(shí)所帶電荷 ? pH=pI 氨基酸呈電中性，電泳不移動(dòng) ? pHpI 氨基酸帶正電
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