蛋白質(zhì)和氨基酸的測定-文庫吧資料
2025-05-07 18:18本頁面
【正文】 緩緩加入 10 mL氫氧化鈉溶液(400 g/L)， 夾緊螺旋夾 ， 通入蒸汽開始蒸餾 。 分別關(guān)閉進(jìn)氣口 （ 注意不要同時關(guān)閉所有進(jìn)氣口 ！ ） ，使廢液自動倒吸于定氮儀外室 ， 再由樣杯加入少量水 ， 沖冼再次 ， 當(dāng)廢液全部吸入外室后 ， 再放排液口 ， 并使其敞開 。于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至 2/3處 ， 加 甲基紅指示劑 3滴及 3～ 5 mL硫酸 ， 以保持水呈酸性 （ 防止水中含有 N， 加硫酸使成為 (NH4)2SO4形式固定下來 ， 蒸餾中不會被蒸發(fā) ） ， 開通電源加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水 。 同樣條件下做一試劑 空白試驗 。 消 化 （若凱氏燒瓶壁粘有碳化粒時，進(jìn)行搖動或待瓶中內(nèi)容物冷卻數(shù)分鐘后，用過氧化氫溶液沖下，繼續(xù)消化至透明為止）。 斜放于溫控電爐上（先墊上石棉網(wǎng)），開始用微火小心加熱，（小心瓶內(nèi)泡沫沖出而影響結(jié)果?。?，待內(nèi)容物全部炭化 ,泡沫完全停止，瓶內(nèi)有白煙冒出后，升至中溫，白煙散盡后升至高溫，加強(qiáng)火力 ,并保持瓶內(nèi)液體微沸 ,（為加快消化速度 ,可分?jǐn)?shù)次加入 10 mL 30%過氧化氫溶液，但必須將燒瓶冷卻數(shù)分鐘以后加入?。?,經(jīng)常轉(zhuǎn)動燒瓶，觀察瓶內(nèi)溶液顏色的變化情況，當(dāng)燒瓶內(nèi)容物的顏色逐漸轉(zhuǎn)化成藍(lán)綠色澄清透明后， 再繼續(xù)加熱 ～ 1h。 角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。 指示劑 紅色 綠色 紅色 （酸） （堿） （酸） 吸收 滴定 吸收 與滴定 2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2B4O7 (NH4)2B4O7 + 5H2O + 2HCl 2NH4Cl + 4H3BO3 2 用過量的 H2SO4 或 HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液吸收，再用 NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過剩的酸液，用甲基紅指示劑。 二：要防止樣液中氨氣逸出。 樣品消化 要注意防止爆沸 消化液 + 40%氫氧化鈉加熱蒸餾，放出氨氣。 所以有機(jī)物全部消化后 ， 出現(xiàn)硫酸銅的蘭綠色 ， 它具有催化功能 ， 還可以作為堿性反應(yīng)指示劑 。 為縮短消化時 間 硫酸銅 作為催化劑同時作為消化終點指示劑 。 消化 蒸餾 吸收 滴定 凱氏定氮法 ④ 步驟 總反應(yīng)式： 2NH2（ CH2） 2COOH + 13H2SO4 （ NH4） 2SO4 + 6CO2 + 12SO2 + 16H2O （一定 要用濃 硫酸 98%） 樣品消化 1 加 硫酸鉀 作為增溫劑，提高溶液沸點，純硫酸沸點 340℃ ，加入硫酸鉀之后可以提高至 400℃ 以上。 溶液 Ⅱ ： 稱取 g甲基紅，溶于乙醇 (95%)，用乙醇 (95%)稀釋至 100 mL。 同時做空白試驗 。 （ GB/T 6012022 化學(xué)試劑 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備 ） 配制 按下表的規(guī)定量取硫酸 ， 緩緩?fù)?1000 mL水中 ， 冷卻 ， 搖勻 。當(dāng)溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀、顏色變化等現(xiàn)象時，應(yīng)重新制備。 ?標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度小于等于 mol/L時，應(yīng)于臨用前將濃度高的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液用煮沸并冷卻的水稀釋，必要時重新標(biāo)定。 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度 [c(HCl)] mol/L 工作基準(zhǔn)試劑無水碳酸鈉的質(zhì)量 m/g 1 ?制備標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度值應(yīng)在規(guī)定濃度值的 177。數(shù)值大于 g時 ， 按精確至 mg稱量 。 同時做空白試驗 。 ③ 試 劑 （ GB/T 《 食品中蛋白質(zhì)的測定 》 第一法） （ GB/T 6012022 化學(xué)試劑 標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備 配制 按下表的規(guī)定量取鹽酸 ， 注入 1000 mL水中 ， 搖勻 。 a) 凱氏燒瓶 500 mL或 250 mL b) 龍科 A— 凱氏定氮儀 c) 扭力天平 d) 分析天平 e) 5mL移液管 f) 溫度可以控制的電爐 g) 小漏斗 h) 滴定管 i) 250 mL錐形瓶 j) 玻璃珠 ② 儀 器 （ GB/T 《 食品中蛋白質(zhì)的測定 》 第一法） ② 儀 器 a) 硫酸銅 (CuSO4?5H2O) b) 硫酸鉀 c) 硫酸 (密度為 ) d) 硼酸溶液 (20g/L) e) 氫氧化鈉溶液 (400g/L) f) 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 [c(HCl)= mol/L] 或硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液 [c(1/2H2SO4)= mol/L] g) 混合指示液： 1份甲基紅乙醇溶液 (1g/L) 與 5份溴甲酚綠乙醇溶液 (1g/L) ， 臨用時混合 。 GB/T 146662022分析化學(xué)術(shù)語 （ 1） 常量凱氏定氮法 ① 原理 樣品 與濃硫酸和催化劑一同加熱消化 ， 使蛋白質(zhì)分解 ， 其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出 ，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨 。 痕量分析 （ trace analysis） ： 對待測組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)小于 %的分析 。 GB/T 嬰幼兒配方食品和乳粉蛋白質(zhì)的測定就是半微量凱氏定氮法 微量分析 （ micro analysis） ： 對 1mg1～ 10 mg的試樣進(jìn)行的分析 。 凱氏定氮法 常量分析 （ macro analysis） ： 對 。 而改良的常量法主要是催化劑的種類 、硫酸和鹽類添加量不同 ， 一般采用硫酸銅 、 二氧化鈦或硒 、 汞等物質(zhì)代替硫酸銅 。 對于不同的蛋白質(zhì) ， 它的組成和結(jié)構(gòu)不同 ， 但從分析數(shù)據(jù)可以得到近似的 pro的元素組成百分比 。 三、蛋白質(zhì)含量測定常用的方法 凱氏定氮法是將蛋白質(zhì)消化 ， 測定其總 N量 ， 再換算成為蛋白質(zhì)含量 。 凱氏定氮法是目前普遍采用的測定有機(jī) N總量較為準(zhǔn)確、方便的方法之一，適用于所有食品，所以國內(nèi)外應(yīng)用較為廣泛。 一般手冊上列出了一部分換稱等數(shù)，用時可查。 二、蛋白質(zhì)系數(shù) 不同的蛋白質(zhì)其氨基酸構(gòu)成比例及方式不同 ， 故各種不同的蛋白質(zhì)其含氮量也不同 ， 一般蛋白質(zhì)含氮量為 16%， 即一份氮素相當(dāng)于 ， 此數(shù)值 （ ） 稱為蛋白質(zhì)系數(shù) 。 （
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