蛋白質(zhì)和多肽的氨基酸序列測(cè)定-文庫(kù)吧資料
2025-05-08 13:42本頁(yè)面
【正文】 與 N端 Edman降解類似的原理， C端分析采用化學(xué)試 劑與蛋白質(zhì)和多肽的 α— 羧基反應(yīng)，反應(yīng)后的 C端衍生物被 切割下來(lái)，通過(guò) HPLC系統(tǒng)進(jìn)行分離分析。 最近，由于對(duì)化學(xué)法測(cè)定 C端技術(shù)進(jìn)行了一系列改進(jìn)，已有了自動(dòng)化 C 端序列儀問(wèn)世。 由于選擇性對(duì) C端羧基進(jìn)行耦聯(lián)修飾并從 C端逐一將氨基酸殘基切下 較 N端測(cè)序困難，在過(guò)去的近 20年里，雖然為數(shù)不少的蛋白質(zhì)化學(xué)家致 力于 C端測(cè)序研究，但目前仍不能和 N端測(cè)序技術(shù)程度媲美。 第六節(jié) C端序列分析 雖然建立在 Edman化學(xué)法上的自動(dòng)化 N端測(cè)序技術(shù)日趨成熟，但仍 有不少問(wèn)題需借助 C端序列分析來(lái)解決。測(cè)序完成 后，電腦將每個(gè)循環(huán)的產(chǎn)率處理，得出起始產(chǎn)率 (initial yield)和重復(fù)產(chǎn) 率 (repetitive yield)，其中通過(guò)起始產(chǎn)率可以估計(jì)蛋白質(zhì)的真實(shí)含量， 有時(shí)可以推測(cè) N端是否封閉 (和氨基酸組成分析測(cè)得的含量相差甚遠(yuǎn) )，而 重復(fù)產(chǎn)率則表明機(jī)器是否正常運(yùn)轉(zhuǎn)。 ③ 另外，絲氨酸和蘇氨酸的 PTI{{汀生物也會(huì)部分轉(zhuǎn)化成其他產(chǎn)物，造 成產(chǎn)率的降低。 ① 對(duì)于有些蛋白質(zhì)由于含有較多的對(duì) Edman反應(yīng)敏感的殘基或肽鍵，裂 解效率將更低。目前最佳產(chǎn)率為 95％～ 98 ％。 第三節(jié) 影響 N端 Edman反應(yīng)裂解率的因素 在測(cè)序中往往可以發(fā)現(xiàn)，即使 N端很均一的蛋白質(zhì) (第一個(gè)循環(huán)出現(xiàn)單 個(gè)氨基酸殘基 )，經(jīng)過(guò)十幾個(gè)循環(huán)后背景明顯不及第一個(gè)殘基清晰。圖 PTH— 氨基酸的色譜分離圖。 在這兩種序列儀中， Edman降解后的 PTH— 氨基酸衍生物可及時(shí)直接 從轉(zhuǎn)化腔中自動(dòng)輸入高效液相色譜儀中進(jìn)行 PTH— 氨基酸衍生物的定性及 定量分析，這樣不僅快速可靠，而且防止了樣品的損失。 20世紀(jì) 80年代末又對(duì)氣相序列儀進(jìn)行了部分改進(jìn)，即將原來(lái)三氟乙酸 以氣體方式輸送改為液相脈沖方式，稱為脈沖液相序列儀，以適應(yīng)不同 樣品的分析需要。為了適應(yīng)分子 生物學(xué)對(duì)蛋白質(zhì)微量分析的要求， 20世紀(jì) 80年代初， Hewick及
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