蛋白質(zhì)與氨基酸(參考版)
2024-10-11 15:54本頁面
【正文】 2．蛋白質(zhì)一級架構(gòu)的測定 概況 : 序列測定前的準備工作 ︰ 樣品的純度 相對分子質(zhì)量 鏈的數(shù)目 氨基酸組成 一級架構(gòu)的測定主要用 小片段重疊 的原理 序列測定方法 （ 1）末端分析 ︰ 包括 N端分析， C端分析 N端分析方法 二硝基氟苯法（ DNP法、 DNFB法或 FDNB法） 丹磺醯氯法（ DNS法） 氨肽酵素（ aminopeptidase, Apase） 法 Ala Val Gly 亮氨酸氨 肽 酵 素 （ Leucine amino peptidase, LAP） 專一性 : A=非極性氨基酸時 快 A=其它氨基酸時 慢 A B N端 A=Leu時 最快 C端分析 硼氫化鋰還原法 H N C H C O O HRL i B H 4H N C H C H 2 O HR水 解混 合 氨 基 酸 H 2 N C H C H 2 O HR+C 端 羧肽酵素（ carboxypeptidase, Cpase） 法 4種羧肽酵素的來源和專一性 羧 酵 來源 專一性 CpA 胰臟 能釋放除 pro、 Arg和 Lys以外的所有 C端氨基酸 CpB 胰臟 主要水解 C端為 Arg或 Lys的 鍵 CpC 植物或微生物 相當(dāng)廣泛 ， 幾乎能釋放 C端的所有氨基酸 CpY 麵包酵母 可釋放 C端所有氨基酸 （ 2）肽鏈的拆開和分離 共價鍵 非共價鍵 （ 3）肽鏈的部分水解 化學(xué)方法 ︰ 溴化氰（ CNBr） 裂解法 : 酵 素分 解方法 （ 4） 短肽段的分離和氨基酸序列測定 （ 5）找重疊肽從而推斷整個肽鏈的氨基酸序列 （ 6）雙硫鍵位置的確定 對角線電泳 （ 7）醯胺基位置的確定 3．蛋白質(zhì)測序舉例 insulin 4．指紋圖譜（ finger print） 法 近年來由於 DNA序列的測定發(fā)展很快，可將相應(yīng)於蛋白質(zhì)的 DNA序列測定出來後，推出蛋白質(zhì)的序列，為蛋白質(zhì)一級架構(gòu)的測定帶來了新的曙光。 蛋白質(zhì)的一級架構(gòu)又稱初級架構(gòu)，二級架構(gòu)、三級架構(gòu)、四級架構(gòu)的三度空間排列稱蛋白質(zhì)的空間架構(gòu)、進階架構(gòu)、三維架構(gòu)或構(gòu)象。 五、蛋白質(zhì)的架構(gòu) 當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空間架構(gòu)時就稱為蛋白質(zhì)。 （三）根據(jù)功能 （ active protein） 包括生命活動過程中一切有活性的蛋白質(zhì)以及它們的前體分子，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)屬於活性蛋白質(zhì)，包括酵素、激素蛋白、運輸?shù)鞍祝ㄞD(zhuǎn)運蛋白）、貯存蛋白、運動蛋白、保護或防禦蛋白、受體蛋白、控制生長和分化蛋白、毒蛋白、膜蛋白等。 (6) 血紅素蛋白（ hemoprotein） ︰ 輔基為血紅素，如血紅蛋白。 (4) 磷蛋白（ phosphoprotein） ︰ 含磷酸，如酪蛋白。 (2) 脂蛋白（ lipoprotein） ︰ 含脂類，如血漿脂蛋白。 2．複合蛋白質(zhì)（ conjugated protein） ︰ 也稱結(jié)合蛋白質(zhì)， 由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩部分組成。 (7) 硬蛋白（ scleroprotein） ︰ 不溶於水、鹽、稀酸、稀鹼溶液。 (5) 組蛋白（ histone） ︰ 溶於水及稀酸溶液，分子中含 Arg、 Lys 較
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