[自然科學(xué)]第九章蛋白質(zhì)的測定-資料下載頁
2025-03-22 08:53本頁面
【正文】 測定 ? 吸取一定量的樣品稀釋液，加入試劑甲，置于 25℃ 中水浴保溫 10min，再加入試劑乙，立即混勻，保溫 30min，以介質(zhì)溶液調(diào)零，測定 A750nm 值，與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液作對照，求出樣品的蛋白質(zhì)的含量。 ? 本法在 0～ 60mg/L 蛋白質(zhì)范圍呈良好線性關(guān)系。 ? 原理 ? 考馬斯亮藍(lán) G－ 250 是一種蛋白質(zhì)染料，與蛋白質(zhì)通過范德華引力結(jié)合，使蛋白質(zhì)染色，在 620nm 處有最大吸收值，可用于蛋白質(zhì)的定量測定。此法簡單而快速，適合大量樣品的測定，靈敏度與福林酚法相似，但不受酚類、游離氨基酸和小分子的影響。 ? 測定 ? 吸取樣品稀釋液 2mL，加染料試劑 2mL，混勻，以介質(zhì)溶液調(diào)零，測定 A620nm，與蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對照，求出樣品蛋白質(zhì)含量。 ? 本法在 0～ 100mg/L 蛋白質(zhì)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 氨基酸態(tài)氮的測定 雙指示劑甲醛滴定法：原理、試劑、測定方法、結(jié)果計算、說明 電位滴定法：原理、試劑、儀器、測定方法、結(jié)果計算 （三）氨基酸態(tài)氮的測定 (1)原理 氨基酸具有酸性的 COOH基和堿性的 NH2基。它們相互作用而使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時， NH2基與甲醛結(jié)合，從而使其堿性消失。這樣就可以用強(qiáng)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液來滴定 COOH基，并用間接的方法測定氨基酸的總量。 R C H H3N C C O R C C OH O H NH2 +HCHO R C COOH H N CH2 +NaOH R CH COONa N CH2 (2) 操作方法 移取含氨基酸約 20～ 30mg的樣品溶液 2份，分別置于 250ml錐形瓶中，各加 50ml 蒸餾水，其中 1份加入 3滴中性紅指示劑，用 準(zhǔn)溶液滴定至由紅變?yōu)? 琥珀 色為終點(diǎn)；另 1份加入 3滴百里酚酞指示劑及中性甲醛 20ml，搖勻，靜置 1分鐘，用 色為終點(diǎn)。分別紀(jì)錄兩次所消耗的堿液 ml數(shù)。 式中 c —— 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度， mol/L。 V1—— 用中性紅作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積， mL。 V2—— 用百里酚酞作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積， mL。 m—— 測定用樣品溶液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量， g —— 氮的毫摩爾質(zhì)量， g/m mol (3) 結(jié)果計算 1 0 00 1 )( 12?????mcVV 氨基酸態(tài)氮 （ %） (1) 原理 根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計的玻璃電極及甘汞電極同時插入被測液中構(gòu)成電池，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，依據(jù)酸度計指示的 pH值判斷和控制滴定終點(diǎn)。 (2) 儀器 酸度計（附磁力攪攔器）； (3) 試驗步驟 ① 吸取含氨基酸約 20mg的樣品溶液，置于 100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻后吸取 ，加 60mL水，開動磁力攪拌器，用 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計指示 （記下消耗 鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)，可計算總酸含量）。 ② 加入 ，混勻。再用 定至 ，記下消耗 。 ③ 同時取 80mL水，先用 ，再加入，用 ，做試劑空白試驗。 ? 主要性能指標(biāo)： 重現(xiàn)性誤差 ≤%，分離度≥。 ? 儀器功能、附件： 氨基酸分析專用儀。 ? 儀器適用范圍： 食品、農(nóng)產(chǎn)品中氨基酸分析。 ? 主要用途： 食品、農(nóng)產(chǎn)品樣品中氨基酸分析。 氨基酸分析儀 第九章 重點(diǎn) 1. 凱氏定氮法原理、分步、測定方法。 2. 雙縮脲法測定原理。 3. 氨基酸總量的測定方法（甲醛滴定法）。
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