生物化學第三章酶化學-資料下載頁
2025-01-16 14:12本頁面
【正文】 S S S S S S S S S S S S S S 亞基全部處于 R型 亞基全部處于 T型 依次序變化 要點： ①配體與亞基結合后才誘導狀態(tài)的改變 ,配 體不在時只有一種構象狀態(tài) ②構象改變 序變 進行，存在雜合態(tài) ③效應可正可負 舉例：天冬氨酸轉氨甲酰酶 (ATCase) ATCase的結構及其催化鏈的別構過度作用 無催化活性構象 (T型 ) C C C C C C R R R R R R 有催化活性構象 (R型 ) C C C C C C R R R R R R ATP（正效應劑） CTP（負效應劑） （二）共價調節(jié) 在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽鏈上的一些基團可與某種化學基團發(fā)生 可逆 的 共價 結合， 從而使酶在 活性 形式與非活性 形式之間相互轉變 ，此過程稱為共價修飾。 ? 常見類型 磷酸化與脫磷酸化（最常見） 乙酰化和脫乙?；? 甲基化和脫甲基化 腺苷化和脫腺苷化 共價調節(jié)特點： 放大效應 酶處于活性及相對非活性狀態(tài) （三）酶原激活 酶原從前體蛋白質變成活性酶的過程稱為酶原激活 糜蛋白質酶 胃蛋白酶 胰蛋白酶 凝血酶 二、酶數量的調節(jié) （一）合成速度調節(jié) 誘導酶： 在正常細胞中含量極少或沒有，當細胞中加入特定誘導物后，誘導產生的酶，含量在 誘導物 存在下顯著增高，誘導物往往是該酶的底物或底物類似物 結構酶：指正常細胞內存在的酶，它的含量較穩(wěn)定，受外界因素影響很小。 主要受 基因 和 代謝 雙重調控 （二）降解速度的調控： 第七節(jié) 酶活力及酶工程 一 酶活力和測定 ： 用在一定條件下，酶催化某一反應的 反應速度 表示。反應速度快，活力就越高。 表示方法：單位時間、單位體積中底物的減少量或 產物 的增加量。 ： (1)IU 在特定條件下， 1分鐘內能轉化 1μmol底物所需的酶量，稱一個國際單位（ IU）。特定條件：25℃ pH及底物濃度采用最適條件 (2) Kat (也稱催量單位 ) 1972年 在最適條件下，每秒鐘能催化 1mol底物轉化為產物所需的酶量規(guī)定為 1 Kat單位 Kat 和 IU的關系： 1Kat=6x107IU (1)酶的比活力 (Specific activity) 每毫克酶蛋白所具有的酶活力。酶的比活力是分析酶的純度是重要指標。 單位： U/mg蛋白質 。 有時用每 克 酶制劑或每 毫升 酶制劑含有多少個活力單位表示。 (2)酶的轉換數 (TN) 亞基或催化中心活性定義：每 mol 的活性亞基或 活性中心 在 一秒 內轉化的底物 的 mol 數 ， 稱為轉換數 TN 也叫催化常數 Kcat 二、酶活力測定方法： （一）終點法： 測反應完成所需要的時間 （二）動力學方法 三、酶的純度 ： 比活力 = 活力單位數 / 毫克蛋白（氮） 純化倍數 = —————— 每次比活力 第一次比活力 產率 %（回收率） = —————— 100 每次總活力 第一次總活力 四、酶的分離純化 酶分離的一般原則 （胞內、胞外；低溫） 具體過程 選材－破碎－抽提－分離純化 方法 : （鹽析法、有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法、選擇性沉淀法）； ： （凝膠過濾法、超離心法）； 質的不同（吸附分離法）； （離子交換層析法、電泳分離法、等電聚焦層析法）； （選擇性變性法）； 、輔因子或抑制劑之間的專一性親和作用（親和層析法）。 五、酶工程 主要內容：研究酶生產、純化、固定化技術、酶分子的修飾和改造及工農業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生等領域的應用 分化學酶工程及生物酶工程 （一）化學酶工程 天然酶 化學修飾酶 固定化酶 酶的固定化就是把水溶性酶經 物理（吸附法與包埋法） 或 化學方法（共價偶聯法與交聯法） 處理后，使酶與惰性載體結合或將酶包埋起來成為一種不溶于水的狀態(tài)。 吸附法 ：使酶被吸附于惰性固體的表面，或吸附于離子交換劑上。 包埋法 ：使酶包埋在凝膠的格子中或聚合物半透膜小膠囊中。 偶聯法 ：使酶通過共價鍵連接于適當的不溶于水的載體上。 交聯法 ：使酶分子依靠雙功能基團試劑交聯聚合成“網狀”結構。 固定化酶 將水溶性酶用物理或化學方法處理 ， 固定于高分子支持物(或載體 )上而成為不溶于水 ， 但仍有酶活性的一種酶制劑形式 ， 稱固定化酶 (immobilized enzyme)。 包埋法 吸附法 共價偶聯法 交聯法 化學酶工程 亦稱初級酶工程 主要由酶學與化學工程技術相互結合而形成 化學修飾 固定化處理 化學合成法 自然酶 化學修飾酶 固定化酶 化學人工酶 改善酶的性質以及提高催化效率及降低成本 研究和應用 固定化酶 指被結合到特定的支持物上并能發(fā)揮作用的一類酶。是化學酶工 程中具有強大生命力的主干。 四種方法 吸附 交聯 共價結合 包埋 優(yōu)點： （ 1）、可以用離心法或過濾法很容易地將酶與反應液 分離開來。在生產中十分 方便有利 （ 2）、可以反復使用 ,達上千次 ,節(jié)約成本 （ 3）、穩(wěn)定性能好 人工酶 模擬酶的生物催化功能，用化學半合成法或化學全合成法合成的酶稱人工酶 生物酶工程 在化學酶工程基礎上發(fā)展起來的，是以酶學和 DNA 重組技術為主的現代分子生物學技術相結合的產物。 亦稱高級酶工程。 三個方面： （ 1）用 DNA重組技術大量地生產酶（ 克隆酶 ） （ 2）對酶基因進行修飾，產生遺傳修飾酶（ 突變酶 ） （ 3）設計新的酶基因，合成自然界不曾有過的能穩(wěn)定 催化效率更高的新酶
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