生物化學(xué)課件4：酶-資料下載頁(yè)
2025-01-16 13:46本頁(yè)面
【正文】 ‖和 “ kat‖酶活力單位的定義和應(yīng)用中，酶催化底物的分子量必須是已知的，否則將無(wú)法計(jì)算 。 習(xí)慣單位 在實(shí)際使用中，不同酶有各自的規(guī)定，如： α 淀粉酶活力單位： 每小時(shí)分解 1g可溶性淀粉的酶量為一個(gè)酶單位。（ QB54680），也有規(guī)定每小時(shí)分解1mL2%可溶性淀粉溶液為無(wú)色糊精的酶量為一個(gè)酶單位。 ② 糖化酶活力單位： 在規(guī)定條件下，每小時(shí)轉(zhuǎn)化可溶性淀粉產(chǎn)生 1mg還原糖（以葡萄糖計(jì)）所需的酶量為一個(gè)酶 ③ 蛋白酶： 規(guī)定條件下，每分鐘分解底物酪蛋白產(chǎn)生1μg ④ DNA限制性內(nèi)切酶： 推薦反應(yīng)條件下，一小時(shí)內(nèi)可完全消化 1μg 純化的 DNA 比活力 :指每 mg酶蛋白質(zhì) /蛋白氮所含的酶活力單位數(shù)。 比活力 =U或 Kat/mg酶蛋白或蛋白氮 (U或 Kat/ml酶液 ,或 U或 Kat/mg酶制劑） 比活力表示酶制劑的 純度 的一個(gè)指標(biāo)。 酶活力中心轉(zhuǎn)換數(shù) :表示酶的催化中心的活性 ,單位時(shí)間 內(nèi)(sec.)每一 催化中心的活性 或 活性中心所轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)，或每 mol酶 活性中心單位時(shí)間轉(zhuǎn)換底物的 mol數(shù) . 轉(zhuǎn)換數(shù) =k3=Vmax/(E0) 酶活力測(cè)定就是測(cè)定一定量的酶，在單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物 (P)的生成（增加）量或底物（ S）的消耗（減少）量。 即測(cè)定時(shí)確定三種量： ① 加入一定量的酶；②一定時(shí)間間隔；③物質(zhì)的增減量。 1） .測(cè)定酶活力常有以下幾種方法 ?反應(yīng)計(jì)時(shí)法 ：反應(yīng)計(jì)時(shí)必須準(zhǔn)確。反應(yīng)體系必須預(yù)熱至規(guī)定溫度后， 加入酶液并立即計(jì)時(shí)。反應(yīng)到時(shí)，要立即滅酶活性，終止反應(yīng)，并記錄終了時(shí)間。終止酶反應(yīng)。 ?常使酶立刻變性最常用的方法： 是加入三氯乙酸或過(guò)氯酸使酶蛋白沉淀。 也可用 SDS使酶變性，或迅速加熱使酶變性。 有些酶可用非變性法來(lái)停止反應(yīng)或用破壞其輔因子來(lái)停止反應(yīng) 。 反應(yīng)量的測(cè)定 法：測(cè)底物減少量或產(chǎn)物生成量均可。在反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物是從無(wú)到有，變化量明顯，極利于測(cè)定，所以大都測(cè)定產(chǎn)物的生成量 2).酶活力測(cè)定的分析方法 具體物質(zhì)量的測(cè)定，據(jù)被測(cè)定物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)通過(guò)定量分析法測(cè)定。 常用的方法有： ?光譜分析法 ：酶將產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)椋ㄖ苯踊蜷g接）一個(gè)可用 分光光度法或熒光光度法 測(cè)出的化合物。 ?化學(xué)法 ：利用化學(xué)反應(yīng)使產(chǎn)物變成一個(gè)可用某種物理方法測(cè)出的化合物，然后再反過(guò)來(lái)算出酶的活性。 ?放射性化學(xué)法 ：用同位素標(biāo)記的底物，經(jīng)酶作用后生成含放射性的產(chǎn)物，在一定時(shí)間內(nèi)，生成的放射性產(chǎn)物量與酶活性成正比。 第九節(jié) 酶的多樣性 一 .多酶復(fù)合體 由幾個(gè)功能相關(guān)的酶嵌合而成的復(fù)合體。 二 . 同工酶 催化同一化學(xué)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)與性質(zhì)不同的一類酶 如：人乳酸脫氫酶 LDH1 H4 73 2 43 14 10 0 43 12 LDH2 H3M 24 4 44 34 25 0 44 49 LDH3 H2M2 3 11 12 35 40 5 12 33 LDH4 HM3 0 27 1 5 20 16 1 6 LDH5 M4 0 56 0 12 5 79 0 0 種類 亞基 活性百分比 心 肝 腎 肺 脾 肌肉 紅細(xì)胞 白細(xì)胞 血清 三 .核酶 1982年 Cech發(fā)現(xiàn)四膜蟲 mRNA前體自我剪接作用， RNA有催化作用 。1983年發(fā)現(xiàn) RNase P中的 RNA可催化 tRNA前體的加工。 : 其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是： （ 1）三個(gè)莖區(qū)形成局部的雙鏈結(jié)構(gòu)；其中含 13個(gè)保守的核苷酸。 （ 2）自我切割位點(diǎn)，位于 GUX的 X外側(cè)， X可表示為 C、 U或 A，不能是 G。 (1).RNA為生物催化劑，具有重要生物學(xué)意義。 打破了酶是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)觀念。 (2).在生命起源問題上，為先有核酸提供了依據(jù)。 (3).為治療破壞有害基因，腫瘤等疾病提供手段 。 核酶是唯一的非蛋白酶。它是一類特殊的 RNA，能夠催化RNA分子中的磷酸酯鍵的水解及其逆反應(yīng) 。 四 .酶原和酶原的激活 沒有活性的酶的前體。 酶原在一定條件下經(jīng)適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)作用可轉(zhuǎn)變成有活性的酶。酶原轉(zhuǎn)變成酶的過(guò)程稱為酶原的激活。 酶原的激活實(shí)質(zhì)上是酶活性部位形成或暴露的過(guò)程。 五 .別構(gòu)酶 (Allosteric enzyme) （一）別構(gòu)酶 (Allosteric enzyme)的特點(diǎn) ：由多亞基組成，包括催化部位和調(diào)節(jié) （別構(gòu)）部位。 ：為小分子，常為底物或產(chǎn)物。 ：指酶和一個(gè)配體（底物，調(diào)節(jié)物）結(jié)合 后可以影響酶和另一個(gè)配體（底物）的結(jié)合能力。 ：不符合米曼方程雙曲線。 ：有正協(xié)同效應(yīng)（為 S型曲線）和負(fù)協(xié)同效應(yīng) 別構(gòu)酶與非調(diào)節(jié)酶動(dòng)力學(xué)曲線的比較 六 .固定化酶 固定化酶：是通過(guò)吸附、耦聯(lián)、交聯(lián)和包埋等物理或化學(xué)的方法 把酶連接到某種載體上，做成仍具有酶催化活性的水不溶性酶。 作用特點(diǎn)：穩(wěn)定性提高，易分離，可反復(fù)使用，提高操作的機(jī)械強(qiáng)度。 連續(xù)反應(yīng)。 固定化酶制備方法： 七 .抗體酶
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