生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能-資料下載頁
2025-01-16 13:39本頁面
【正文】 中帶負(fù)電荷的基團(tuán)形成難溶鹽 ④加入生物堿和某些酸類 如：秋水仙堿，茶堿 如：鞣酸、單寧酸、苦味酸、三氯醋酸 與蛋白質(zhì)中帶正電荷的基團(tuán)形成難溶鹽 ? 哪些沉淀為可逆沉淀？ ? 哪些沉淀為不可逆沉淀（變性沉淀 ） ?天然蛋白質(zhì)受到理化因素的影響，分子內(nèi)部嚴(yán)格的空間結(jié)構(gòu)受到破壞，從而引起蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變，但 并不導(dǎo)致蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的破壞 ，這種現(xiàn)象稱為 蛋白質(zhì)變性作用 。 ?蛋白質(zhì)變性的因素有： ①物理因素 —— 加熱（ 70－ 100℃ ）、劇烈振蕩或攪拌、紫外線、 X射線、超聲波 ②化學(xué)因素 —— 強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、尿素、胍、去污劑、甲醛、重金屬鹽、三氯醋酸、磷鎢酸、苦味酸、濃乙醇 ?蛋白質(zhì)變性的本質(zhì)是： ① 維持蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)的次級鍵被破壞； ② 蛋白質(zhì)分子從有序卷曲結(jié)構(gòu)變?yōu)闊o序松散結(jié)構(gòu)； ③ 一級結(jié)構(gòu)沒有變化，分子量和分子組成不變。 ?變性蛋白的特征： ① 生物活性喪失 （最主要） ； ② 理化性質(zhì)改變 —— 溶解度下降，易沉淀、結(jié)晶能力喪失、粘度增加、擴(kuò)散速度下降等 。 ③ 生化性質(zhì)改變 —— 肽鏈松散、反應(yīng)基 團(tuán)增加、易被蛋白酶水解。 ? 變性條件若不過于激烈，一旦條件去除，則變性蛋白恢復(fù)原來的構(gòu)象，這種現(xiàn)象叫作變性蛋白的 復(fù)性作用 (renaturation)。 ? 隨 變性時間的增加、變性條件的加劇及變性程度的加深 ，復(fù)性的可能性逐漸降低 核糖核酸酶 A ①沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性，如鹽析作用 ②變性的蛋白質(zhì)也不一定沉淀，如牛奶加熱沸騰 思考： 蛋白質(zhì)變性與沉淀之間的關(guān)系 ①雙縮脲反應(yīng) (Biuret Reaction) 雙縮脲在堿性溶液中與 CuSO4作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物的反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有許多類似雙縮脲結(jié)構(gòu)的肽鍵 ,所以也能發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。 (可定性定量分析蛋白質(zhì)） ②黃色反應(yīng) 蛋白質(zhì)遇濃硝酸會變黃，這一反應(yīng)為 Phe、 Tyr、 Trp等含苯環(huán)的氨基酸所特有。 ③米倫氏反應(yīng) (Millon Reaction) 蛋白質(zhì)溶液中加入米倫試劑 (HgNO2 、 HgNO3 、 HNO3和 HNO2的混和液 )，產(chǎn)生白色沉淀，加熱 則變?yōu)榧t色沉淀，此為 Tyr的酚基所特有的 反應(yīng)，因此含有 Tyr的蛋白質(zhì)均有此反應(yīng)。 ④水合茚三酮反應(yīng) (Ninhydrin Reaction) α－ 氨基酸與水合茚三酮作用時，產(chǎn)生藍(lán)紫色反應(yīng)，由于蛋白質(zhì)是由許多 α－ 氨基酸組成的，所以也呈此顏色反應(yīng)。 (可定性定量分析蛋白質(zhì)） ⑤其他顏色反應(yīng) 乙醛酸反應(yīng) 會產(chǎn)生紫色環(huán)，用于鑒定含 Trp的 反應(yīng)； 坂口反應(yīng) 會產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，用于鑒定 含 Arg的反應(yīng)； 酚試劑反應(yīng) 是酚試劑與蛋白質(zhì) 反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色化合物。 ? 大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的 Phe、Tyr、 Trp(共軛雙鍵體系 )。 ? 這三種氨基酸在 280nm 附近有最大吸收峰，因此大多數(shù)蛋白質(zhì)在 280nm 附近顯示強(qiáng)的吸收。 ? 利用這個性質(zhì)，可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行定性鑒定。 ? 定量可能測不準(zhǔn)
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