生物化學(xué)蛋白質(zhì)(3)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 15:11本頁(yè)面
【正文】 r 法 （ 1） N末端測(cè)定方法 ② Edman法 此法最大優(yōu)點(diǎn)是除去 N末端氨基酸后剩下的肽鏈部分仍是完整的。 因此，可以用來(lái)一步步地測(cè)定多肽鏈 N末端的氨基酸順序。氨基酸自動(dòng)分析儀就是根據(jù)此原理制成的。 N H 2 C H C O R 2 N C S N H C H C O R 2 N C H C O R 1 H H N H S : C C H C O R 1 H N N H C H C O R 2 S N H C N H O C R 1 C H N C O C H N H S C R 1 苯異硫氰酸酯 苯乙內(nèi)酰硫脲 N H 2 C H C O R 2 + + + （ 1） N末端測(cè)定方法 ③丹磺酰氯法 ?在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以與 N端氨基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰 氨基酸。 ?此法的優(yōu)點(diǎn)是丹磺酰 氨基酸有 很強(qiáng)的熒光性質(zhì)，檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到 1?109mol。 （ 1） N末端測(cè)定方法 ④氨肽酶法 ? 從多肽鏈的 N端逐個(gè)的向里水解 。 ? 可根據(jù) 不同的反應(yīng)時(shí)間測(cè)出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的 N末端殘基順序 。 ? 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸殘基為 N末端的肽鍵速度最大 。 （ 2） C末端分析方法 多肽與肼在無(wú)水條件下加熱， C端氨基酸即從肽鏈上解離出來(lái)，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與 C端氨基酸分離。 ①肼解法 （ 2） C末端分析方法 ②羧肽酶水解法 ? 能從多肽鏈的 C端逐個(gè)的水解。根據(jù)不同的反應(yīng)時(shí)間測(cè)出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的 C末端殘基順序 。 ? 目前常用的羧肽酶有四種： A,B,C和 Y。 A和 B來(lái)自胰臟； C來(lái)自柑桔葉； Y來(lái)自面包酵母 。 ? 羧肽酶 A能水解除 Pro,Arg和 Lys以外的所有 C末端氨基酸殘基； B只能水解 Arg和 Lys為 C末端殘基的肽鍵 。 ? 但實(shí)際有時(shí)相連的氨基酸以相近的速度釋放，結(jié)果不好分析。 （ 2） C末端分析方法 ②羧肽酶水解法 （ 2） C末端分析方法 氨基酸的釋放量（摩爾數(shù)） 反應(yīng)時(shí)間 Gly Ser Val 判斷序列 ValSerGlyCOOH ②羧肽酶水解法 第五節(jié) 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)
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