【正文】 β轉(zhuǎn)角的特定構(gòu)象在一定程度上取決于它的氨基酸組成。 第四節(jié) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測定與多肽人工合成 一、一級結(jié)構(gòu)的研究方法 二、研究蛋白質(zhì)構(gòu)象的方法 三、肽的人工合成 一、一級結(jié)構(gòu)的研究方法 1．測定氨基酸的組成 2．蛋白質(zhì)的 N末端和 C末端的測定 3．二硫鍵的拆開和肽鏈的分離 4．肽鏈的部分水解和肽段的分離 5．肽段氨基酸順序的測定 6．二硫鍵位置的確定 1．測定氨基酸的組成 確定蛋白質(zhì)所含氨基酸的種類，并明確每種氨基酸有多少。 ①肼解法 （ 2） C末端分析方法 ②羧肽酶水解法 ? 能從多肽鏈的 C端逐個(gè)的水解。 ? 可根據(jù) 不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的 N末端殘基順序 。 亞基通常由一條多肽鏈組成，有時(shí)含兩條以上的多肽鏈，單獨(dú)存在時(shí)一般沒有生物活性。 氫鍵 （ 3） β轉(zhuǎn)角 蛋白質(zhì)分子中，肽鏈經(jīng)常會(huì)出現(xiàn) 180176。 例如，鏈中有脯氨酸，則螺旋被中斷，產(chǎn)生一個(gè)“結(jié)節(jié)”。 目前已確定蛋白質(zhì)具有一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)，三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)等四個(gè)主要結(jié)構(gòu)層次。 （ 1） α螺旋 ③每個(gè)螺旋周期包含 基，螺距為 nm，每個(gè)氨基酸沿螺旋軸的長度上升 nm。平行的 β片層結(jié)構(gòu)中，兩個(gè)殘基的間距為 nm；反平行的 β片層結(jié)構(gòu)，則間距為 nm。一個(gè)分子中的結(jié)構(gòu)域區(qū)間以共價(jià)鍵相連。 N H 2 C H C O R 2 N C S N H C H C O R 2 N C H C O R 1 H H N H S : C C H C O R 1 H N N H C H C O R 2 S N H C N H O C R 1 C H N C O C H N H S C R 1 苯異硫氰酸酯 苯乙內(nèi)酰硫脲 N H 2 C H C O R 2 + + + （ 1） N末端測定方法 ③丹磺酰氯法 ?在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以與 N端氨基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰 氨基酸。 A和 B來自胰臟； C來自柑桔葉； Y來自面包酵母 。 ? 在酸性條件下水解，得到黃色 DNP氨基酸。 1．蛋白質(zhì)分子的二級結(jié)構(gòu) α螺旋 β折疊片 β轉(zhuǎn)角 無規(guī)卷曲 1．蛋白質(zhì)分子的三級結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)是指上述蛋白質(zhì)的 α螺旋、 β折疊以及 β轉(zhuǎn)角等二級結(jié)構(gòu)受側(cè)鏈和各主鏈構(gòu)象單元間的相互作用，從而進(jìn)一步卷曲、折疊成