a-淀粉酶發(fā)酵的生產(chǎn)工藝-資料下載頁
2024-10-10 11:24本頁面
【導讀】糖、低聚糖和葡萄糖等，是工業(yè)生產(chǎn)中應用最為廣泛的酶制劑之一。以及紡織等許多行業(yè)。本次設計的淀粉酶發(fā)酵，分別以玉米粉為碳源，以豆餅為。介紹了α-淀粉酶的生產(chǎn)工藝。我們從BF7658出發(fā)，用紫外光及化學藥品反復交替誘變，選育適用于固體發(fā)酵的新菌體BF7658—1。該菌為短桿狀，革蘭氏陽性，兩端鈍。曲箱內，通風保持37～42℃，培養(yǎng)48小時出曲風干。溶液沉淀酶，經(jīng)離心，用濃酒精洗滌脫水，40℃烘干、磨粉即為成品。前種子培養(yǎng)基），37℃培養(yǎng)三天，使之形成芽孢，以提高種子的穩(wěn)定性。接種到500升種子罐，37℃攪拌通風培養(yǎng)12～14小時。中途三倍碳源的培養(yǎng)基補料，體積相當于基礎料的1∕3，從培養(yǎng)。12小時開始，每小時一次，分30余次添加完畢。理30分鐘，以破壞共存的蛋白酶，促使膠體凝聚而易于過濾。量；③注意培養(yǎng)基的pH和濕度。發(fā)酵培養(yǎng)基的要求是營養(yǎng)要適當豐富和完全適合于菌種的生理特性和要求，發(fā)酵罐培養(yǎng)基經(jīng)消毒滅菌冷卻后接入3%～5%種子培養(yǎng)成熟液。
【正文】 多問題。為了獲得高純度的 α 一 淀粉酶，開始人們利用軟基質的離子交換色譜和親和色譜分離純化了 α淀粉酶的粗酶提取液。但是，軟基質色譜介質的機械強度小，受壓易變形，分析速度慢，分離效率低，柱壽命短，固定相對 PH、離子強度和壓力非常敏感，反復使用時配體碎片容易脫落。由于以上缺點，軟基質色譜有逐漸被硬基質色譜取代的趨勢。在硬基質色譜應用方面，李華儒等首次合成一種對 α一 淀粉酶具有特異親和能力的色譜介質，并成功地分離純化了工業(yè)粗酶，獲得了高純度產(chǎn)品，其活性回收率 88%， Kato 等也用高效疏水色譜純化了 α淀粉酶粗品，回收率為90%。之后其采用高效液相離子交換色譜純化 α一 淀粉酶很好地分離了 α一 淀粉酶粗品， 其活性回收率高達 96%，比活性達 388μ/mg 蛋白質。此法的研究成功10 10 10 為大規(guī)模制備高純度 α一 淀粉酶提供了一個新工藝路線。 實驗方法 （ 1）反膠團系統(tǒng)的配置 將適當比例的正丁醇和異辛烷加入比色管，搖勻。再加入適量 CTAB，放入加熱套中加熱溶解，搖勻，使其均勻分布于有機相，得到澄清透明穩(wěn)定的反膠團系統(tǒng)。 （ 2）前萃取 將 α淀粉酶溶解于不同緩沖液中，稀釋，并用 4 層潔凈紗布濾清。磷酸氫二鈉 檸檬酸緩沖液， pH(pI)，構成初始水相。將反膠團相和水相置于 50 mL 帶塞三角燒瓶中，在振蕩器上劇烈搖晃后 (250 r/min, 10 min)，傾入離心管，進行離心 (3 500 r/min, 5 min)，用滴管小心地將兩相分開取上層有機相待用。 （ 3）反萃取 用去離子水配制適當 pH 值 (pHpI)和離子強度的緩沖液作為反萃取水相，與前萃取所得的有機相混合，放入恒溫水浴鍋加熱片刻，在振蕩機上劇烈搖晃后 (250 r/min， 10 min)，傾入離心管，進行離心 (3500 r/min， 5 min)。用滴管小心地將兩相分開，下層水相即為純化的淀粉酶。 分析和測試方法 （ 1） α淀粉酶活力的測定，采用國標 QB/1803— 93，對萃取前的粗酶以及萃取后的精制酶的酶活力進行測定，依據(jù)所附“吸光度和淀粉酶酶濃度對照表”。將吸光度換算為酶活濃度 c，進而求出酶活 D660。按下式計算： D660=c n 式中： c——— 測試酶液濃度， u/g； n——— 樣品的稀釋倍數(shù)， g/mL。 平行試驗相對誤差不得超過 2%。 （ 2） α淀粉酶萃取率 E：按下式計算： E=反萃取水相中酶的總活力分相前加入的酶總活力 100% 工藝流程圖如下 10 10 10 5. 結論： 提高 作用來實現(xiàn)。經(jīng) NTG 反復多次對 B. subtilis 菌株進行誘變處理，在一定程度上打破了酶合成調控機制和酶分泌調 節(jié)機制，從而獲得了 α淀粉酶高產(chǎn)變異株。CTAB/正丁醇 /異辛烷反膠團系統(tǒng)萃取工業(yè)級 α淀粉酶的最佳條件為：萃取溫度40℃，水相組成為 NaCl0. 03 mol/L， pH 12. 0，有機相∶無機相 =1∶ 2，振蕩時間 10 mi；反萃取溫度 60℃，反萃取水相組成為： KCl3 mol/L， pH 4. 0，有機相：無機相 =2： 1，反萃取振蕩時間 10 min。在上述條件下 ,經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后， α淀粉酶的萃取率最高可達 %。反膠團萃取分離酶具有單級萃取率高、能實現(xiàn)連續(xù)操作等優(yōu)點，可望發(fā)展成為一種生 物產(chǎn)品分離的新方法。 食品生物技術導論
黨政相關相關推薦
鄂ICP備17016276號-1