a-淀粉酶發(fā)酵的生產(chǎn)工藝(編輯修改稿)
2024-11-15 11:24 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 h后 1： ，培養(yǎng)時(shí)間為 28～ 36 h。 （二）此培養(yǎng)基的制備 發(fā)酵培養(yǎng)基：蛋白胨 5g，酵母膏 ，葡萄糖 ,可溶性淀粉 ， KH2PO4 1g， ， ， H2O 500mL， 。分裝于 100mL錐形瓶中，每瓶 50mL， 121℃ 滅菌 20min。 接種環(huán)灼燒滅菌后，輕輕刮取斜面種子培養(yǎng)基中的少量菌體，接入液體培養(yǎng)基中，并使環(huán)在液體與管壁接觸的部位輕輕摩擦，使菌體分散于液體中。 37℃ 振蕩培養(yǎng) 48 h。 將發(fā)酵液置高速冷凍離心機(jī)中 10000r/min 離心 10 min，除菌體，上清液即為α－ 淀粉酶粗酶液。 2 α淀粉酶的菌種選育 α淀粉酶生產(chǎn)：以枯草芽孢桿菌 14140 為出發(fā)菌株 ,經(jīng)亞硝基胍反 復(fù)多次處理10 10 10 和篩選生產(chǎn) α淀粉酶。分離純化：以 CTAB/正丁醇 /異辛烷構(gòu)成反膠團(tuán)系統(tǒng) ,通過反膠團(tuán)萃取方式純化精制 α淀粉酶。最佳反應(yīng)條件為：萃取溫度 40℃，水相組成為 NaCl0. 03 mol/L， pH 12. 0，有機(jī)相：無機(jī)相 =1∶ 2，振蕩時(shí)間 10 min；反萃取最佳條件為：溫度 60℃，水相組成為 KCl3 mol/L， pH 4. 0，有機(jī)相∶無機(jī)相 =2∶ 1，反萃取振蕩時(shí)間 10 min。在上述條件下，經(jīng)過一個(gè)萃取與反萃取循環(huán)后， α淀粉酶的萃取率最高可達(dá) 90. 78%。 菌株與培養(yǎng)方法 培養(yǎng)基 BY 斜面培養(yǎng)基每 100 g 含可溶性淀粉 1 g ，牛肉膏 1 g，蛋白胨 1 g，酵母膏 g， NaCl g，瓊脂 2 g. BY 發(fā)酵培養(yǎng)基每 100 g 含可溶性淀粉 5 g，牛肉膏 1 g，蛋白胨 g，酵母膏 g， NaCl ， CaCl21 g。調(diào)節(jié) ，經(jīng) 121℃，滅菌 30 min，備用。 儀器設(shè)備 全自動(dòng)高壓滅菌鍋、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、恒溫?fù)u床、離心機(jī)、分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、移液管、 PH 試紙、吸耳球、玻璃棒、量筒、試管、試管架、酒精燈、電子天平、三角燒瓶、洗瓶、接種針、接種環(huán)、直尺、記號(hào)筆等。 2. 2 實(shí)驗(yàn)方法 2． 2． 1 細(xì)菌的分離與初步鑒定： 將土壤系列稀釋，把 103 、 10 105 分別涂布到淀粉培養(yǎng)基上， 27℃倒置培養(yǎng) 2 天，將長出的菌落接入斜面。將細(xì)菌從斜面接種到淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng) 2 天，用碘液染色，記錄透明 圈大小和菌落直徑，計(jì)算 D/d 值。保菌供下次實(shí)驗(yàn)用。 2． 2． 2 紫外線誘變育種： 取活化后的菌種配成 菌懸液、稀釋；倒淀粉培養(yǎng)基平板，將菌懸液涂布其表面；用紫外線處理平板 0、 2min、 4min、 6min、 8min、 10min，每個(gè)處理 2 次重復(fù)；放到黑暗中倒置培養(yǎng)， 37℃培養(yǎng) 48h，分別計(jì)數(shù)誘變組和對(duì)照組平板上的菌落數(shù)，并計(jì)算致死率；加入碘液，分別測量誘變組和對(duì)照組菌落的透明圈直徑和菌落直徑，計(jì)算 D/d 值；將 D/d 值最大的菌種保存到斜面培養(yǎng)基上。 誘變方法以及變異菌株的篩選 10 10 10 ①誘變出發(fā)菌株在完全培 養(yǎng)基中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期后期。 ② 以 NTG為誘變劑，按一定處理劑量 (μg/ml)，在一定 pH值的緩沖液中 30℃恒溫振蕩處理 1~4 h。 ③經(jīng)高速離心分離，移植于液體完全培養(yǎng)基進(jìn)行后培養(yǎng)。 ④經(jīng)稀釋涂布在含有 1%淀粉 BY 固體培養(yǎng)基上，經(jīng) 24 h
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