a-淀粉酶發(fā)酵的生產(chǎn)工藝(參考版)
2024-10-14 11:24本頁面
【正文】 食品生物技術導論 。在上述條件下 ,經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后， α淀粉酶的萃取率最高可達 %。經(jīng) NTG 反復多次對 B. subtilis 菌株進行誘變處理，在一定程度上打破了酶合成調(diào)控機制和酶分泌調(diào) 節(jié)機制，從而獲得了 α淀粉酶高產(chǎn)變異株。 平行試驗相對誤差不得超過 2%。將吸光度換算為酶活濃度 c，進而求出酶活 D660。用滴管小心地將兩相分開，下層水相即為純化的淀粉酶。將反膠團相和水相置于 50 mL 帶塞三角燒瓶中，在振蕩器上劇烈搖晃后 (250 r/min, 10 min)，傾入離心管，進行離心 (3 500 r/min, 5 min)，用滴管小心地將兩相分開取上層有機相待用。 （ 2）前萃取 將 α淀粉酶溶解于不同緩沖液中，稀釋，并用 4 層潔凈紗布濾清。 實驗方法 （ 1）反膠團系統(tǒng)的配置 將適當比例的正丁醇和異辛烷加入比色管，搖勻。之后其采用高效液相離子交換色譜純化 α一 淀粉酶很好地分離了 α一 淀粉酶粗品， 其活性回收率高達 96%，比活性達 388μ/mg 蛋白質(zhì)。由于以上缺點，軟基質(zhì)色譜有逐漸被硬基質(zhì)色譜取代的趨勢。為了獲得高純度的 α 一 淀粉酶，開始人們利用軟基質(zhì)的離子交換色譜和親和色譜分離純化了 α淀粉酶的粗酶提取液。采用 PEG(聚乙二醇 )／硫酸銨雙水相體系，進行分離純化 α－ 淀粉酶，結果表明，在室溫下由 PEG 和硫酸銨所組 成的雙水相體系，對 α－ 淀粉酶的回收率可達 ％，分配系數(shù)可達 。應用雙水相系統(tǒng) PEG／磷酸鹽分離純化 α－ 淀粉酶，增加 PEG 濃度有助于酶富集上相。在上述條件下，經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后，淀粉酶的萃取率最高可達 90. 78%。以 CTAB /正丁醇 /異辛烷構成反膠團系統(tǒng)，通過反膠團萃取方式純化精制 α淀粉酶。 但上述方法存在的共同問題是，連續(xù)操作和規(guī)模放大都比較困難。 鹽析沉淀、凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水作用層析、親和層析和電泳等，是蛋白質(zhì)分離純化的主要方法。分離純化 α－ 淀粉酶的方法很多，一般都是依據(jù)酶分子的大小、形狀、電荷性質(zhì)、溶解度、穩(wěn)定性、專一性結合位點等性質(zhì)建立的。經(jīng) NTG 處理所得的變異菌株的產(chǎn)酶穩(wěn)定性較差 ,必須經(jīng)反復多次單菌落分離和搖瓶比較，逐漸篩選出產(chǎn)酶穩(wěn)定性好的菌株。 經(jīng) NTG 反復多次處理， α淀粉酶活力有較大幅度提高。將菌株作逐一對比，從中篩選出酶活較高的產(chǎn)酶菌株。 ⑧把 KII2 液用噴霧器均勻分布在 disc 培養(yǎng)皿培養(yǎng)基的表面上，并挑出淀粉水解圈大的 disc，用相對應的 1 ml 培養(yǎng)液接種搖瓶，進行發(fā)酵測定酶活力。 ⑦用微量注射器分別吸取培養(yǎng)液，移植到相應的 disc 上。倒入 200 mm 300mm 長方形不銹鋼玻璃培養(yǎng)皿中，冷卻凝固。 ⑤把單菌落分別移植于含 2%淀粉 BY 液體培養(yǎng)基中， 30℃培養(yǎng) 36 h。 ③經(jīng)高速離心分離，移植于液體完全培養(yǎng)基進行后培養(yǎng)。 誘變方法以及變異菌株的篩選 10 10 10 ①誘變出發(fā)菌株在完全培 養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期后期。保菌供下次實驗用。 2. 2 實驗方法 2． 2． 1 細菌的分離與初步鑒定： 將土壤系列稀釋，把 103 、 10 105 分別涂布到淀粉培養(yǎng)基上， 27℃倒置培養(yǎng) 2 天，將長出的菌落接入斜面。調(diào)節(jié) ，經(jīng) 121℃，滅菌 30 min，備用。在上述條件下，經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后， α淀粉酶的萃取率最高可達 90. 78%。分離純化：以 CTAB/正丁醇 /異辛烷構成反膠團系統(tǒng) ,通
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