土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定(參考版)
2025-05-19 02:53本頁面
【正文】 [1]周德慶，徐德強．微生物學實驗教程（第3版）．高等教育出版社．2013[2]孫建義，許梓榮．芽孢桿菌的分離鑒定及應(yīng)用研究．浙江農(nóng)業(yè)學報11（1） 47~50，1999[3]，等．伯杰式細菌學鑒定手冊（第八版）．科學出版社．1984：729~759．[4]鄒偉，趙玉軍等．土壤中芽孢桿菌的分離及初步鑒定．[J]，02期[5]傅冰，王東明．土壤中產(chǎn)淀粉酶菌株的分離、鑒定及提高產(chǎn)酶能力的研究．[J]綠色科技，2012，03．3[6] 楊慧， 2007,2。通過鑒定可以得知，兩種菌株的耐鹽情況較好，但是對極度溫度的抗逆性不是很明顯，而由于試驗條件、沒有選擇合適的溫度梯度也是一個重要因素；而由于芽孢桿菌在不良環(huán)境下具有一定的抗逆性的這種良好的性狀使得其在生產(chǎn)應(yīng)用中有廣泛的應(yīng)用。而生理生化鑒定由于條件限制我們只能進行部分項目，總體情況良好，對于某些項目，例如卵黃實驗、溶菌酶試驗、酪素、酪氨酸、還存在一些不同，在老師講解過來，還需要經(jīng)過討論、理解后才開始實施，實驗操作也存在一些差錯導致項目重來的情況，造成時間和材料的浪費，說明實驗預(yù)習和設(shè)計的時候在這方面做還存在不足，對項目的了解和認識還不夠深入。對芽孢桿菌的形態(tài)學和生理生化鑒定基本情況良好。這個實驗是小組通力合作，小組成員的分工配合、團結(jié)協(xié)作是我們完成這個實驗的關(guān)鍵之一；良好的配合使得我們在配制培養(yǎng)基和實驗操作上快人一步，而對于某個項目的不清楚的地方的討論也有助于加深小組成員對實驗的理解，小組有分歧，有爭論，最終通過討論或者查閱資料詢問老師而得出結(jié)果，既有利于實驗的進行，也加強了成員間的溝通和交流。例如①這個實驗需要我們從土壤中提取的芽孢桿菌，因此在操作需要進行嚴格的無菌控制防止雜菌污染，實驗器具在操作前的滅菌，培養(yǎng)基使用前的滅菌，無菌室的消毒和無菌操作等等，這些操作都需要一個比較長的時間等待，我們在等待的時間里可以提前做好下一個步驟的準備工作，例如培養(yǎng)基的配制、接種、清洗器具等，有助于我們縮短整個實驗的用時②在由土壤制備菌懸液時，需要加入玻璃珠使細胞離散有利于形成單菌落，在實驗前需要將玻璃珠放入錐形瓶中一同高壓蒸汽滅菌，有組別事先忘記加入玻璃珠，需要重新加入玻璃珠再次滅菌，增加了多余的環(huán)節(jié)，延長了實驗時間；③我們小組在進行VP實驗過程中，由于使用了錯誤的試劑，無法得到準確正常的實驗結(jié)果，需要重新配置培養(yǎng)基和接種，造成了時間和材料的浪費，三次劃線后，只有一個平板出現(xiàn)明顯單菌落，大多數(shù)呈現(xiàn)為菌苔，鏡檢結(jié)果表明所選菌株均已純化；說明我們所選擇的時間周期（24h）對多數(shù)菌株的來說培養(yǎng)過長，在后續(xù)的實驗中，無論是接種培養(yǎng)還是留種，都應(yīng)當適當縮短培養(yǎng)時間，防止培養(yǎng)時間過長導致菌種老化或者活性降低，所有產(chǎn)淀粉酶的菌株結(jié)果都為陽性，但是在該實驗中缺乏陰性對照，難以判斷是否因為染色、脫色的操作或者時間問題導致觀測出現(xiàn)偏差或者個人對顏色深淺判斷一定的主觀影響，因此在進行類似實驗操作時，建議與革蘭氏陰性菌例如大腸桿菌混合，形成對照，使觀測更易判斷和描述，結(jié)果更準確和有說服力，操作不當可能導致染色效果不明顯或者洗脫時菌體容易被沖掉，需要耐心操作；小組操作過程中發(fā)現(xiàn)，可以在滴入35滴孔雀綠溶液后，置于火焰上方較高處直接烘烤，冒白煙（不沸騰）至干之后直接洗脫，比較簡便，且可以達到較好的觀察效果；但該操作缺乏重復(fù)和對照，不能判斷是巧合造成的僅對我們所選取的菌株有效還是有推廣的可行性，有兩株菌落形態(tài)相似的菌株出現(xiàn)相反的情況，說明這兩株菌株很大可能是不同的，有些菌株菌落看起來相似，但實際上可能是不同的菌株，也反映了生理生化鑒定和基因檢測的必要性，兩種菌在2％、7％、10％鹽濃度培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后都能正常生長，說明這兩種菌對于高濃度的鹽環(huán)境具有一定的抗逆性；但是在5％鹽濃度的兩個平行培養(yǎng)基上兩種菌株總共4個接種點都不生長，其中編號1B的菌株在常溫下放置5天后又出現(xiàn)生長的跡象，除去接種操作過程中存在的問題，推測可能為配置耐鹽過程中出現(xiàn)錯誤，鹽的用量不準確或者倒平板時對各個平板對應(yīng)的鹽濃度標示錯誤，因此該實驗的結(jié)果可能存在不準確和偏差；在時間條件允許的情況下，應(yīng)該對該實驗進行重復(fù)，兩種菌在在5℃和60℃的極端環(huán)境中不生長，在25℃和45℃中生長，且在45℃中長勢較好，說明這兩種菌的生長最適溫度都偏高，其中編號1B的菌落出現(xiàn)擴散的現(xiàn)象，可能原因是接種過程中沾到斜面上的冷凝水，使得菌體擴散；結(jié)合純化培養(yǎng)時該菌株也出現(xiàn)類似的情況和培養(yǎng)時間應(yīng)該縮短的判斷，猜測此菌株培養(yǎng)時間過長，開始出現(xiàn)老化的跡象，在45℃，本次實驗只選擇了4個溫度梯度，中間間隔過大，不能很好地反應(yīng)這兩種菌對環(huán)境的抗逆性情況，培養(yǎng)基配制后基本為紫色，但是部分培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌后變?yōu)榫萍t色，查詢資料后知道該實驗使用的酸堿指示劑溴甲酚紫是作為酸堿指示劑加入在，（黃）（紫），通過詢問老師得知使用高壓蒸汽滅菌在升溫和降溫的過程較長，在這個過程中，可能某些物質(zhì)發(fā)生變化，使得溶液的酸堿度發(fā)生變化；思考：是否可以用pH試紙直接檢測培養(yǎng)后的培養(yǎng)基的酸堿度；或者培養(yǎng)后再加入酸堿指示劑；可能結(jié)果較不為直觀，但應(yīng)該可達到相同的目的，即產(chǎn)酸產(chǎn)氣的檢測 VP實驗中，在加入ɑ酚萘后上層溶液變?yōu)椴煌该鞯娜榘咨睾鬅o任何明顯變化，詢問老師后得知，可能為加入藥品錯誤，堿性不足，發(fā)生了其他的反應(yīng)；之后發(fā)現(xiàn)其他組別也出現(xiàn)類似的情況，基本確定為加入的堿性物質(zhì)濃度不足，沒有形成強堿環(huán)境，具體變化不明；重復(fù)試驗，其中編號1B出現(xiàn)一個陽性一個陰性結(jié)果，由于接種時種子培養(yǎng)基內(nèi)存在較多冷凝水，可能沒取到菌種或者數(shù)量較少，不排除受污染的情況；由于時間關(guān)系未再進行重復(fù)，該實驗也提醒我們在實驗過程中應(yīng)該保持小心、仔細，藥品的選用和用量都可能對結(jié)果造成干擾，并且也再次提醒我們重復(fù)實驗和平行對照的重要性、酪氨酸水解和卵磷脂酶實驗中，由于酪素、酪氨酸和卵黃中含有蛋白質(zhì)
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