土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測(cè)定-展示頁(yè)
2025-05-25 02:53本頁(yè)面
【正文】 色物質(zhì)的吸光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可求出樣品中還原糖的含量。因此可用于篩選產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌。 有些細(xì)菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。其方法是先用結(jié)晶紫初染，再加媒染劑碘液以增加染料與細(xì)胞的親和力，使結(jié)晶紫和碘在細(xì)胞膜上形成相對(duì)分子質(zhì)量較大的復(fù)合物，然后進(jìn)行脫色（乙醇），最后用沙黃液復(fù)染。其方法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦著色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。 細(xì)菌的芽孢的形狀、大小和著生位置是鑒定的重要依據(jù)。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。在一般情況下，細(xì)菌菌體多帶負(fù)電荷，易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。因此，純培養(yǎng)的確定除觀(guān)察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到。獲取單個(gè)菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線(xiàn)等技術(shù)完成。微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，在芽孢桿菌屬中，我們鑒定用的生理生化實(shí)驗(yàn)有：（1）革蘭氏染色試驗(yàn)（2）芽孢染色試驗(yàn)(3)淀粉水解試驗(yàn)（4）吲哚試驗(yàn)（5）VP試驗(yàn)（6）細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)（葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇）（7）耐鹽試驗(yàn)（8）溫度實(shí)驗(yàn)（9）PH試驗(yàn)(10)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(11)硝酸鹽還原試驗(yàn)(12)明膠液化試驗(yàn)(13)酪氨酸水解試驗(yàn)(14)酪素水解試驗(yàn)(15)運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)（鞭毛穿刺試驗(yàn)）(16)接觸酶試驗(yàn)(17)溶菌酶試驗(yàn)(18)卵磷脂試驗(yàn) (19) 馬尿酸鹽實(shí)驗(yàn)（不做）（20）苯丙氨酸實(shí)驗(yàn)（不做）（21）精氨酸水解實(shí)驗(yàn)（不做） 從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物分離與純化。土壤中可利用的微生物很多，因此從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，分離純化，并進(jìn)行酶活測(cè)定，能獲得有經(jīng)濟(jì)價(jià)值比較高的菌株。目前生產(chǎn)應(yīng)用的淀粉酶主要來(lái)源于微生物，并集中在幾種細(xì)菌和真菌中，尤其以芽孢桿菌所產(chǎn)的淀粉酶較多。發(fā)現(xiàn)于不同的生境，少數(shù)種對(duì)脊椎動(dòng)物和非脊椎動(dòng)物致病。該屬細(xì)菌的重要生理特性是能夠產(chǎn)生對(duì)對(duì)熱、pH和鹽各種多樣性的不利條件具有特殊抵抗力的芽孢。：芽孢桿菌屬，革蘭氏陽(yáng)性，嚴(yán)格需氧或兼性厭氧的有莢膜的桿菌。細(xì)胞染色大多數(shù)在幼齡培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性，以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。（1）了解微生物分離純化的原理及微生物分離純化常用方法和技術(shù)；（2）掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理及方法；（3）掌握微生物的搖瓶培養(yǎng)方法及淀粉酶活力測(cè)定的原理及方法；（4）培養(yǎng)學(xué)生自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程、綜合分析解決問(wèn)題及判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力；（5）對(duì)所學(xué)習(xí)過(guò)的微生物實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行綜合技能訓(xùn)練；（6）從不同環(huán)境土壤樣品中篩選出能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，并分析比較各產(chǎn)淀粉酶菌株的產(chǎn)淀粉酶活力及總結(jié)各芽孢桿菌在土壤中的分布情況。芽孢桿菌是土壤細(xì)菌中最具活力的部分之一,也是土壤細(xì)菌的主要種群之一。土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定及淀粉酶活的測(cè)定摘 要：從飯?zhí)瞄T(mén)口和生化樓樓下的土壤中分離、純化、培養(yǎng)獲得七個(gè)菌株，其中五個(gè)為能分泌淀粉的芽孢桿菌，通過(guò)一系列生理生化實(shí)驗(yàn)，對(duì)其中兩個(gè)菌株的種屬進(jìn)行了初步鑒定，并對(duì)其中一株菌所產(chǎn)的淀粉酶活力進(jìn)行了測(cè)定。關(guān)鍵字：土壤 芽孢桿菌 淀粉酶 鑒定 活力 土壤微生物類(lèi)群在全球自然生態(tài)系統(tǒng)中具有不可替代的作用,它推動(dòng)著生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán),維持生態(tài)系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn),是生態(tài)系統(tǒng)中的重要組成部分,在土壤中的分布既反映土壤、植物和氣候等綜合因素對(duì)微生物的影響和作用,同時(shí)其生命活動(dòng)也反映出土壤肥力、土壤改良與植物營(yíng)養(yǎng)的密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)小組合作，由老師指導(dǎo)，小組自行設(shè)計(jì)、進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)土壤微生物進(jìn)行分離、純化及鑒定，發(fā)酵及產(chǎn)物測(cè)定，對(duì)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰M(jìn)行一個(gè)比較全方面的鍛煉和培養(yǎng)。：芽孢桿菌細(xì)胞呈直桿狀，常以成對(duì)或鏈狀排列，具圓端或方端。芽孢橢圓、卵圓、柱狀、圓形，能抗許多不良環(huán)境。多數(shù)為腐生菌,主要分布于土壤、動(dòng)植物體表及水體中。生孢不被氧所抑制。） 淀粉酶是催化淀粉水解的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中。其原因首先芽孢桿菌屬中能產(chǎn)生淀粉酶的菌種較多；其次，芽孢桿菌屬產(chǎn)的淀粉酶有較好的應(yīng)用價(jià)值。 由于各種細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，所以它們能利用的底物（如糖、醇及各種含氮物質(zhì)等）不同，或雖利用相同的底物但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物卻不相同，因此可利用各種生理生化反應(yīng)來(lái)鑒別不同的細(xì)菌。由于芽孢具有較強(qiáng)抗熱能力，分離純化時(shí)可采用熱處理的方法，高溫加熱處理，殺死樣品中所有不含芽孢的菌類(lèi)，在培養(yǎng)過(guò)程中得到很好的富集。其基本原理是選擇適合與待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。值得指出的是，從微生物群體中經(jīng)分離生長(zhǎng)在平板上的單個(gè)菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。 用一種染色劑對(duì)涂片進(jìn)行染色，簡(jiǎn)便易行，適于進(jìn)行微生物的形態(tài)觀(guān)察。因此，常用堿性染料進(jìn)行單染色，如美藍(lán)、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等。使用酸性染料時(shí)，必須降低染液的PH值，使其呈現(xiàn)強(qiáng)酸性（低于細(xì)菌菌體等電點(diǎn)），讓菌體帶正電荷，才易于被酸性染料染色。芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般的染色法只能使菌體著色而芽孢不著色。 它可以將所有細(xì)菌分為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌兩大類(lèi)，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別性染色法，可以把它歸到生理生化鑒定上。凡細(xì)菌不被脫色而保留初染劑的顏色者為陽(yáng)性；如被脫色后又染上復(fù)染劑顏色（紅色）者則為陰性。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)色。（1）淀粉—水解（淀粉酶）—生成麥芽糖（還原糖）（2）在堿性條件下，還原糖與3,5二硝基水楊酸共熱，3,5二硝基水楊酸被還原為3
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