土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定-免費閱讀
【正文】 因此，對于實驗的學習和熟悉仍然是我們的一個需要重點把握的方面，而是作為一個學習生物學的學生應當掌握的技能。從土樣1中分離出3個菌株，經(jīng)過鏡檢判斷均已純化，分別標記為1A,1B,1C從土樣2中分離出4個菌株，經(jīng)過鏡檢判斷均已純化，分別標記為2A,2B,2C,2D1A1B1C2A2B2C2D淀粉酶+++++革蘭氏+++++芽孢+++++“+”表示產(chǎn)淀粉酶/芽孢/陽性，反之“”，無淀粉酶的菌株不做芽孢染色觀察編號1A個體較小，短桿狀，排列散落，單個或短鏈狀菌落白色略透明，菌落中等，表面光滑，非常濕潤，有光澤，邊緣整齊，易挑起產(chǎn)孢情況孢子端生，多游離，不膨大編號1B個體較小，短桿或近橢圓，多短鏈狀排列菌落淺黃色不透明，菌落較小，表面粗糙，有明顯褶皺，較干燥，邊緣整齊，易挑起產(chǎn)孢情況孢子端生，膨大明顯編號2A個體較細，長桿狀，鏈狀排列菌落黃色不透明，菌落較大，表面光滑濕潤，邊緣整齊，易挑起產(chǎn)孢情況孢子偏端，不膨大編號2B個體桿狀，中等長度，長鏈狀排列菌落白色不透明，菌落較大，表面粗糙，略干燥，邊緣不平整呈絨毛狀，難挑起產(chǎn)孢情況中生，不膨大，多游離編號2C個體較小，長桿狀，多短鏈狀排列菌落白色不透明，菌落較大，表面濕潤光滑有光澤，邊緣平整，易挑起產(chǎn)孢情況孢子偏端生，輕微膨大 選取1B、2C進行生理生化鑒定項目1B2C1212VP+++吲哚+++糖 發(fā) 酵葡萄糖++++木糖阿拉伯糖甘露醇溫 度5℃25℃++++37℃++++45℃++++++++60℃耐 鹽2％++++++++5％7％++++++++10％++++硝酸鹽還原++酪素分解++酪氨酸分解卵磷脂酶++接觸酶++++溶菌酶++運動性++++明膠液化檸檬酸鹽++根據(jù)《伯杰氏細菌學手冊》1C應為凝結(jié)芽孢桿菌,2C為蜂房芽孢桿菌選擇編號2C的菌株作為酶活測定對象第一組（我們組）麥芽糖g/L0吸光度0第三組（其他組）麥芽糖g/L0吸光度0由于第三組所測得的標準曲線擬合情況較好，因此將第三組的標準曲線作為標準來進行測定和計算空白樣品1樣品2吸光度0麥芽糖g/L經(jīng)計算樣品1的酶活=（+）/218=樣品2的酶活=（+）/218=編號2C的菌株在該發(fā)酵配方的培養(yǎng)下酶活U=（+）/2= 這個實驗對于我們來說是一個較為長時間的實驗，加之實驗設備器材有限，需要排隊輪候，因此在實驗過程中，對整個實驗流程的整體規(guī)劃和安排，以及各個實驗環(huán)節(jié)的嚴謹操作，都有利于減少實驗時間和等待?！鏈叵渲信囵B(yǎng)24h，則表明能利用檸檬酸鹽作為碳源生長，以“+”表示。37℃溫箱中培養(yǎng)24h。3048h后，觀察培養(yǎng)基中是否有透明圈產(chǎn)生，挑選有透明圈的聚落則為能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌。繼續(xù)分區(qū)劃線，重復3次。：，并在無菌操作下倒平板(共13個，19=232＋1其中2個土樣，3個稀釋度，每種2個平行對照，,1個為空白對照)。2H2O（%）MgSO4凡細菌不被脫色而保留初染劑的顏色者為陽性；如被脫色后又染上復染劑顏色（紅色）者則為陰性。因此，常用堿性染料進行單染色，如美藍、孔雀綠、堿性復紅、結(jié)晶紫和中性紅等。其基本原理是選擇適合與待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。） 淀粉酶是催化淀粉水解的一類酶的總稱，廣泛存在于動物、植物和微生物中。：芽孢桿菌細胞呈直桿狀，常以成對或鏈狀排列，具圓端或方端。芽孢桿菌是土壤細菌中最具活力的部分之一,也是土壤細菌的主要種群之一。該屬細菌的重要生理特性是能夠產(chǎn)生對對熱、pH和鹽各種多樣性的不利條件具有特殊抵抗力的芽孢。根據(jù)《伯杰氏細菌學手冊》，在芽孢桿菌屬中，我們鑒定用的生理生化實驗有：（1）革蘭氏染色試驗（2）芽孢染色試驗(3)淀粉水解試驗（4）吲哚試驗（5）VP試驗（6）細菌糖發(fā)酵試驗（葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇）（7）耐鹽試驗（8）溫度實驗（9）PH試驗(10)檸檬酸鹽利用試驗(11)硝酸鹽還原試驗(12)明膠液化試驗(13)酪氨酸水解試驗(14)酪素水解試驗(15)運動性試驗（鞭毛穿刺試驗）(16)接觸酶試驗(17)溶菌酶試驗(18)卵磷脂試驗 (19) 馬尿酸鹽實驗（不做）（20）苯丙氨酸實驗（不做）（21）精氨酸水解實驗（不做） 從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)
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