【正文】 觀(guān)地對(duì)比出菌株生長(zhǎng)或者不生長(zhǎng)，但是對(duì)于菌株的生長(zhǎng)情況比較難以把握，在溶菌酶試驗(yàn)中可以使用固體培養(yǎng)基，用小濾紙片浸沒(méi)在溶菌酶中，通過(guò)透明圈的大小來(lái)判斷抑制情況，編號(hào)1B的菌種能對(duì)檸檬酸鹽進(jìn)行利用，但該實(shí)驗(yàn)一直到第五天才出現(xiàn)輕微現(xiàn)象，第六天才出現(xiàn)明顯現(xiàn)象，說(shuō)明芽孢桿菌對(duì)檸檬酸鹽的利用能力較低，需要長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)觀(guān)察才能做出判定，僅是初步鑒定，缺乏比較嚴(yán)格的重復(fù)和對(duì)照，部分項(xiàng)目可能存在誤差，部分項(xiàng)目由于條件限制沒(méi)有實(shí)施，實(shí)際操作中對(duì)微生物的種的鑒定還應(yīng)該進(jìn)行基因檢測(cè)和鑒定才能最終判斷 我們選取淀粉檢驗(yàn)時(shí)透明圈較大的2C作為酶活檢測(cè)對(duì)象，實(shí)際結(jié)果酶活力較并不高；通過(guò)課堂知識(shí)和老師講解，我們知道種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方不同是由于微生物的最適生長(zhǎng)條件和最適產(chǎn)物條件的不同，對(duì)于我們選用的菌株，要得出最適的發(fā)酵配方是需要建立大量的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上的，我們通過(guò)查詢(xún)資料得帶的配方只能作為參考使用，實(shí)際上可能并非該菌株的最優(yōu)配方；因此測(cè)得的酶活力相應(yīng)的只能作為一個(gè)參考量，并非該菌株的酶活的最優(yōu)結(jié)果6．綜合討論通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，我們對(duì)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)，從開(kāi)始查閱資料、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)到實(shí)驗(yàn)操作、記錄和總結(jié)有一個(gè)比較清晰的了解，同時(shí)也確實(shí)體會(huì)到了做實(shí)驗(yàn)的辛苦。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》及各個(gè)鑒定項(xiàng)目的結(jié)果，給所挑選的菌株鑒定到種 +100mL蒸餾水，5－二硝基水楊酸試劑2ml,沸水浴準(zhǔn)確煮沸5min，取出冷卻，用蒸餾水稀釋至20ml，記錄吸光值，麥芽糖含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。若培養(yǎng)基為綠色則為陰性，以“—”表示。 VP試驗(yàn)℃溫箱中培養(yǎng)24h％NaOH溶液1020d，再加入等量ɑ酚萘在37℃溫箱中保留15min，若培養(yǎng)液變紅，則為陽(yáng)性，用“＋”表示，反之。標(biāo)明菌種產(chǎn)地。(芽孢染色要培養(yǎng)30h，我們直接從鑒定淀粉水解酶的培養(yǎng)基中挑出菌進(jìn)行了芽孢染色)。（第五天）： 挑選有透明圈的菌落，再進(jìn)行革蘭氏染色和芽孢染色，驗(yàn)證菌落為紫色，革蘭氏陽(yáng)性菌且有綠色芽孢出現(xiàn)。： 將分離的單個(gè)菌落接種至淀粉水解培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)基接種3個(gè)菌落，每種菌接種一個(gè)平板。（第二三四天） 將第四次劃線(xiàn)得到的單個(gè)菌落進(jìn)行單染色。在所選平板中選取形態(tài)大小顏色等不同的菌落6~8種，分別用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑起，分別進(jìn)行分區(qū)劃線(xiàn)(3個(gè)區(qū))并做標(biāo)記。,103,104的懸浮液進(jìn)行涂布平板(每種樣品的每個(gè)稀釋度涂布3個(gè)平板)。：(錐形瓶中放有玻璃珠)2中(即為稀釋的土壤懸浮液)，塞好棉塞，充分振蕩20min，使土壤中菌體或芽孢子均勻分散，并置于80℃恒溫水浴中保持20min，/100℃恒溫水浴中保持10min，以殺死非芽孢的菌體。7H2O(%)FeSO4在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度量呈一定的比例關(guān)系，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可求出樣品中還原糖的含量。 有些細(xì)菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。其方法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦著色后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。因此，純培養(yǎng)的確定除觀(guān)察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到。微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，在芽孢桿菌屬中，我們鑒定用的生理生化實(shí)驗(yàn)有：（1）革蘭氏染色試驗(yàn)（2）芽孢染色試驗(yàn)(3)淀粉水解試驗(yàn)（4）吲哚試驗(yàn)（5）VP試驗(yàn)（6）細(xì)菌糖發(fā)酵試驗(yàn)（葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇）（7）耐鹽試驗(yàn)（8）溫度實(shí)驗(yàn)（9）PH試驗(yàn)(10)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(11)硝酸鹽還原試驗(yàn)(12)明膠液化試驗(yàn)(13)酪氨酸水解試驗(yàn)(14)酪素水解試驗(yàn)(15)運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)（鞭毛穿刺試驗(yàn)）(16)接觸酶試驗(yàn)(17)溶菌酶試驗(yàn)(18)卵磷脂試驗(yàn) (19) 馬尿酸鹽實(shí)驗(yàn)（不做）（20）苯丙氨酸實(shí)驗(yàn)（不做）（21）精氨酸水解實(shí)驗(yàn)（不做） 從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物分離與純化。目前生產(chǎn)應(yīng)用的淀粉酶主要來(lái)源于微生物，并集中在幾種細(xì)菌和真菌中，尤其以芽孢桿菌所產(chǎn)的淀粉酶較多。該屬細(xì)菌的重要生理特性是能夠產(chǎn)生對(duì)對(duì)熱、pH和鹽各種多樣性的不利條件具有特殊抵抗力的芽孢。細(xì)胞染色大多數(shù)在幼齡培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性，以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。芽孢桿菌是土壤細(xì)菌中最具活力的部分之一,也是土壤細(xì)菌的主要種群之一。關(guān)鍵字：土壤 芽孢桿菌 淀粉酶 鑒定 活力 土壤微生物類(lèi)群在全球自然生態(tài)系統(tǒng)中具有不可替代的作用,它推動(dòng)著生態(tài)系統(tǒng)的能量流動(dòng)和物質(zhì)循環(huán),維持生態(tài)系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn),是生態(tài)系統(tǒng)中的重要組成部分,在土壤中的分布既反映土壤、植物和氣候等綜合因素對(duì)微生物的影響和作用,同時(shí)其生命活動(dòng)也反映出土壤肥力、土壤改良與植物營(yíng)養(yǎng)的密切關(guān)系。：芽孢桿菌細(xì)胞呈直桿狀，常以成對(duì)或鏈狀排列，具圓端或方端。多數(shù)為腐生菌,主要分布于土壤、動(dòng)植物體表及水體中。） 淀粉酶是催化淀粉水解的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中。 由于各種細(xì)菌具有不同的酶系統(tǒng)，所以它們能利用的底物（如糖、醇及各種含氮物質(zhì)等）不同，或雖利用相同的底物但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物卻不相同，因此可利用各種生理生化反應(yīng)來(lái)鑒別不同的細(xì)菌。其基本原理是選擇適合與待分離微生物的生長(zhǎng)條件，如營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。值得指出的是，從微生物群體中經(jīng)分離生長(zhǎng)在平板上的單個(gè)菌落并不一定保證是純培養(yǎng)。因此，常用堿性染料進(jìn)行單染色，如美藍(lán)、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等。芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般的染色法只能使菌體著色而芽孢不