【正文】 得出結(jié)果，既有利于實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，也加強(qiáng)了成員間的溝通和交流。而生理生化鑒定由于條件限制我們只能進(jìn)行部分項(xiàng)目，總體情況良好，對于某些項(xiàng)目，例如卵黃實(shí)驗(yàn)、溶菌酶試驗(yàn)、酪素、酪氨酸、還存在一些不同，在老師講解過來，還需要經(jīng)過討論、理解后才開始實(shí)施，實(shí)驗(yàn)操作也存在一些差錯導(dǎo)致項(xiàng)目重來的情況，造成時間和材料的浪費(fèi)，說明實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)和設(shè)計的時候在這方面做還存在不足，對項(xiàng)目的了解和認(rèn)識還不夠深入。[1]周德慶，徐德強(qiáng)．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程（第3版）．高等教育出版社．2013[2]孫建義，許梓榮．芽孢桿菌的分離鑒定及應(yīng)用研究．浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報11（1） 47~50，1999[3]，等．伯杰式細(xì)菌學(xué)鑒定手冊（第八版）．科學(xué)出版社．1984：729~759．[4]鄒偉，趙玉軍等．土壤中芽孢桿菌的分離及初步鑒定．[J]，02期[5]傅冰，王東明．土壤中產(chǎn)淀粉酶菌株的分離、鑒定及提高產(chǎn)酶能力的研究．[J]綠色科技，2012，03．3[6] 楊慧， 2007,2。通過鑒定可以得知，兩種菌株的耐鹽情況較好，但是對極度溫度的抗逆性不是很明顯，而由于試驗(yàn)條件、沒有選擇合適的溫度梯度也是一個重要因素；而由于芽孢桿菌在不良環(huán)境下具有一定的抗逆性的這種良好的性狀使得其在生產(chǎn)應(yīng)用中有廣泛的應(yīng)用。對芽孢桿菌的形態(tài)學(xué)和生理生化鑒定基本情況良好。例如①這個實(shí)驗(yàn)需要我們從土壤中提取的芽孢桿菌，因此在操作需要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌控制防止雜菌污染，實(shí)驗(yàn)器具在操作前的滅菌，培養(yǎng)基使用前的滅菌，無菌室的消毒和無菌操作等等，這些操作都需要一個比較長的時間等待，我們在等待的時間里可以提前做好下一個步驟的準(zhǔn)備工作，例如培養(yǎng)基的配制、接種、清洗器具等，有助于我們縮短整個實(shí)驗(yàn)的用時②在由土壤制備菌懸液時，需要加入玻璃珠使細(xì)胞離散有利于形成單菌落，在實(shí)驗(yàn)前需要將玻璃珠放入錐形瓶中一同高壓蒸汽滅菌，有組別事先忘記加入玻璃珠，需要重新加入玻璃珠再次滅菌，增加了多余的環(huán)節(jié)，延長了實(shí)驗(yàn)時間；③我們小組在進(jìn)行VP實(shí)驗(yàn)過程中，由于使用了錯誤的試劑，無法得到準(zhǔn)確正常的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要重新配置培養(yǎng)基和接種，造成了時間和材料的浪費(fèi)，三次劃線后，只有一個平板出現(xiàn)明顯單菌落，大多數(shù)呈現(xiàn)為菌苔，鏡檢結(jié)果表明所選菌株均已純化；說明我們所選擇的時間周期（24h）對多數(shù)菌株的來說培養(yǎng)過長，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，無論是接種培養(yǎng)還是留種，都應(yīng)當(dāng)適當(dāng)縮短培養(yǎng)時間，防止培養(yǎng)時間過長導(dǎo)致菌種老化或者活性降低，所有產(chǎn)淀粉酶的菌株結(jié)果都為陽性，但是在該實(shí)驗(yàn)中缺乏陰性對照，難以判斷是否因?yàn)槿旧?、脫色的操作或者時間問題導(dǎo)致觀測出現(xiàn)偏差或者個人對顏色深淺判斷一定的主觀影響，因此在進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn)操作時，建議與革蘭氏陰性菌例如大腸桿菌混合，形成對照，使觀測更易判斷和描述，結(jié)果更準(zhǔn)確和有說服力，操作不當(dāng)可能導(dǎo)致染色效果不明顯或者洗脫時菌體容易被沖掉，需要耐心操作；小組操作過程中發(fā)現(xiàn)，可以在滴入35滴孔雀綠溶液后，置于火焰上方較高處直接烘烤，冒白煙（不沸騰）至干之后直接洗脫，比較簡便，且可以達(dá)到較好的觀察效果；但該操作缺乏重復(fù)和對照，不能判斷是巧合造成的僅對我們所選取的菌株有效還是有推廣的可行性，有兩株菌落形態(tài)相似的菌株出現(xiàn)相反的情況，說明這兩株菌株很大可能是不同的，有些菌株菌落看起來相似，但實(shí)際上可能是不同的菌株，也反映了生理生化鑒定和基因檢測的必要性，兩種菌在2％、7％、10％鹽濃度培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后都能正常生長，說明這兩種菌對于高濃度的鹽環(huán)境具有一定的抗逆性；但是在5％鹽濃度的兩個平行培養(yǎng)基上兩種菌株總共4個接種點(diǎn)都不生長，其中編號1B的菌株在常溫下放置5天后又出現(xiàn)生長的跡象，除去接種操作過程中存在的問題，推測可能為配置耐鹽過程中出現(xiàn)錯誤，鹽的用量不準(zhǔn)確或者倒平板時對各個平板對應(yīng)的鹽濃度標(biāo)示錯誤，因此該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可能存在不準(zhǔn)確和偏差；在時間條件允許的情況下，應(yīng)該對該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行重復(fù)，兩種菌在在5℃和60℃的極端環(huán)境中不生長，在25℃和45℃中生長，且在45℃中長勢較好，說明這兩種菌的生長最適溫度都偏高，其中編號1B的菌落出現(xiàn)擴(kuò)散的現(xiàn)象，可能原因是接種過程中沾到斜面上的冷凝水，使得菌體擴(kuò)散；結(jié)合純化培養(yǎng)時該菌株也出現(xiàn)類似的情況和培養(yǎng)時間應(yīng)該縮短的判斷，猜測此菌株培養(yǎng)時間過長，開始出現(xiàn)老化的跡象，在45℃，本次實(shí)驗(yàn)只選擇了4個溫度梯度，中間間隔過大，不能很好地反應(yīng)這兩種菌對環(huán)境的抗逆性情況，培養(yǎng)基配制后基本為紫色，但是部分培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌后變?yōu)榫萍t色，查詢資料后知道該實(shí)驗(yàn)使用的酸堿指示劑溴甲酚紫是作為酸堿指示劑加入在，（黃）（紫），通過詢問老師得知使用高壓蒸汽滅菌在升溫和降溫的過程較長，在這個過程中，可能某些物質(zhì)發(fā)生變化，使得溶液的酸堿度發(fā)生變化；思考：是否可以用pH試紙直接檢測培養(yǎng)后的培養(yǎng)基的酸堿度；或者培養(yǎng)后再加入酸堿指示劑；可能結(jié)果較不為直觀，但應(yīng)該可達(dá)到相同的目的，即產(chǎn)酸產(chǎn)氣的檢測 VP實(shí)驗(yàn)中，在加入ɑ酚萘后上層溶液變?yōu)椴煌该鞯娜榘咨睾鬅o任何明顯變化，詢問老師后得知，可能為加入藥品錯誤，堿性不足，發(fā)生了其他的反應(yīng)；之后發(fā)現(xiàn)其他組別也出現(xiàn)類似的情況，基本確定為加入的堿性物質(zhì)濃度不足，沒有形成強(qiáng)堿環(huán)境，具體變化不明；重復(fù)試驗(yàn)，其中編號1B出現(xiàn)一個陽性一個陰性結(jié)果，由于接種時種子培養(yǎng)基內(nèi)存在較多冷凝水，可能沒取到菌種或者數(shù)量較少，不排除受污染的情況；由于時間關(guān)系未再進(jìn)行重復(fù)，該實(shí)驗(yàn)也提醒我們在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)該保持小心、仔細(xì)，藥品的選用和用量都可能對結(jié)果造成干擾，并且也再次提醒我們重復(fù)實(shí)驗(yàn)和平行對照的重要性、酪氨酸水解和卵磷脂酶實(shí)驗(yàn)中，由于酪素、酪氨酸和卵黃中含有蛋白質(zhì)等物質(zhì)在高溫條件下變性，因此不能直接高溫（121℃）蒸汽滅菌，應(yīng)當(dāng)根據(jù)材料的不用采取不同的方法，例如酪素和酪氨酸在110℃滅菌，蛋黃在無菌條件下取用即可 ，兩種菌對偏酸性的抗逆性較低；溶菌酶試驗(yàn)表明編號2C的菌株對溶菌酶具有一定的抗逆性；，通過渾濁度可以直