土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定-在線瀏覽
2025-07-03 02:53本頁面
【正文】 氨基5硝基水楊酸(棕紅色物質(zhì))，還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物。（3）40℃時在5min內(nèi)水解淀粉釋放1mg麥芽糖所需的酶量為1個酶活力單位（U）計(jì)算公式:酶活力單位（U）=C酶V酶n（C酶—酶液中麥芽糖的濃度 V酶—提取液的總體積 n—酶液的稀釋倍數(shù)） 土樣2種樣品1：生化樓樓下河道邊樣品2：菊苑飯?zhí)煤箝T附近 牛肉膏 （3g） 蛋白胨（10g） 氯化鈉 （5g） 瓊脂（15g）蒸餾水 （1000ml）pH （淀粉牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基）可溶性淀粉（2g） 牛肉膏（3g） 蛋白胨（10g） 氯化鈉（5g ） 瓊脂（15g） 蒸餾水（1000ml）pH 甲液（+5mol/L醋酸100mL乙液（ + 5mol/醋酸100mL）硝酸鉀() 蛋白胨 (5g)蒸餾水(1000ml)pH 營養(yǎng)瓊脂 () 葡萄糖(1g) 配成100ml培養(yǎng)基 卵黃鹽水(5ml)卵黃、鹽水分別滅菌，按1:1制取培養(yǎng)基與卵黃鹽水混合倒平板蛋白胨 (10g) 氯化鈉 (5g)蒸餾水 (1000ml) pH VP實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基 蛋白胨(10g) 氯化鈉 (5g) 葡萄糖 (5g) 蒸餾水 (1000ml)pH 葡萄糖/木糖/甘露醇/阿拉伯糖 （10g） 蛋白胨(10g) 氯化鈉 (5g) K2HP04() 1％溴甲酚紫(3ml) 蒸餾水 (1000ml) pH 酪氨酸()營養(yǎng)瓊脂() （分開滅菌，酪氨酸溶液110℃，營養(yǎng)瓊脂121℃，用時再混合，） 脫脂奶粉（5g，稀釋到50ml） 瓊脂（）（分開滅菌，酪素110℃，營養(yǎng)瓊脂121℃，現(xiàn)用現(xiàn)倒） 可溶性淀粉（2g） 牛肉膏(3g)蛋白胨(10g) 氯化鈉(5g)瓊脂 (5g)蒸餾水 (1000ml)pH (制斜面）氯化鈉(5g) 硫酸鎂(MgSO42H2O（%）MgSO4H2O(%) 蒸餾水100mL pH=（培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌：利用水的沸點(diǎn)隨水蒸氣壓力的增加而上升，以達(dá)到100 ℃以上高溫（121 ℃）滅菌的方法。稱重，編號2.。，編號為102,103,104用移液槍吸取1號錐形瓶內(nèi)土壤懸浮液1ml加入編號為102的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹洗數(shù)次，即成為102的土壤稀釋液；同法從編號102試管內(nèi)取1ml加入編號為103的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹洗數(shù)次，即成為103的土壤稀釋液；依次連續(xù)稀釋為104的土壤稀釋液。：，并在無菌操作下倒平板(共13個，19=232＋1其中2個土樣，3個稀釋度，每種2個平行對照，,1個為空白對照)。用移液槍吸取各土樣各個稀釋度的土壤懸浮液100ul，放入平板中，用灼燒后的玻璃涂棒沿一個方向涂勻。（第一天），觀察三個稀釋度下的平板的菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)在30~300的平板，舍棄不符合的平板。(按每種土樣選取5種菌計(jì)算，約10=25個平板)。繼續(xù)分區(qū)劃線，重復(fù)3次。檢查獲得的菌種是否單一，是否為桿狀菌。 單染色法 涂片（1％HCl清潔，滴加1DH2O于載玻片，挑菌與水混勻）干燥固定（涂面朝上，微火，23次）染色（冷卻，加結(jié)晶紫12d，染色12min）水洗（倒去染色液沖洗至無色）干燥鏡檢。37℃溫箱中培養(yǎng)24h。3048h后，觀察培養(yǎng)基中是否有透明圈產(chǎn)生，挑選有透明圈的聚落則為能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌。以致確定其具有芽孢，為芽孢桿菌。 涂片干燥固定加溫染色（加5％孔雀綠染色，微火加熱至冒蒸汽維持5min）冷卻水洗（至無色）復(fù)染（加番紅染色2min，水洗吸干）油鏡鏡檢。在不同培養(yǎng)基中挑選所得滿足條件的菌種并編號A、B、C......假設(shè)一共n種菌。37℃溫箱中培養(yǎng)24h。：：：從各試管斜面培養(yǎng)基上取菌種重新接種到新的平板上，37℃溫箱中培養(yǎng)24h?！鏈叵渲信囵B(yǎng)24h，充分振蕩，使吲哚萃取到乙醚中，靜置分層，然后沿管壁加入10d吲哚試劑，若有吲哚存在，則乙醚層顯玫瑰紅色，為陽性，用“＋”表示，反之用“”。（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、木糖、甘露醇、阿拉伯糖發(fā)酵水培養(yǎng)液中（杜氏小管)(各糖含量為1％）℃溫箱中培養(yǎng)24h，則產(chǎn)酸，若杜氏小管中有氣泡，則產(chǎn)氣(整個過程中不能人為制造氣泡)，冷卻至室溫，與酪氨酸混勻制成平板，置37℃溫箱中培養(yǎng)24h℃溫箱中培養(yǎng)24h， 將接種針從直立柱培養(yǎng)基中央自 上而下直刺到離管底 處，沿原穿刺線拔出接種針 37℃恒溫箱培養(yǎng) 24h。℃溫箱中培養(yǎng)24h，則表明能利用檸檬酸鹽作為碳源生長，以“+”表示。（連續(xù)培養(yǎng)觀察大約一星期左右為宜）％,5％,7％,10％鹽濃度梯度的培養(yǎng)基(用營養(yǎng)瓊脂再加氯化鈉即可)℃溫箱中培養(yǎng)24h，觀察并比較菌落長勢℃,25℃,45℃,37℃,60℃的溫度梯度，深度至明膠層2/3處，觀察是否被細(xì)菌液化，如被液化，則為陽性，能產(chǎn)生蛋白酶0123456麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml）0蒸餾水（mL）0、乙液等量混合后（ mL）加入培養(yǎng)基內(nèi)，立即觀察結(jié)果若呈現(xiàn)紅色則為陽性“+”，若無紅色出現(xiàn)則為陰性“”，產(chǎn)生白色圓圈表示卵磷脂分解生成脂肪，說明有卵磷脂酶。％的無菌溶菌酶母
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