【導(dǎo)讀】公用工程是指除廠房以外各種生產(chǎn)所共用的其他設(shè)施。高質(zhì)量的產(chǎn)品，必須在生產(chǎn)過程中防止污染和混藥，或者將這種可能性降至最低程度。氧氣等氣體、蒸汽、熱水及工藝用冷水等，這些廠房設(shè)施構(gòu)成了藥品生產(chǎn)所需的環(huán)境條件。廠房與設(shè)施是藥品生產(chǎn)的根本條件，是實施GMP不可缺少的硬件。合性的潔凈技術(shù)體系中的潔凈室的驗證是本章討論的重點。對潔凈室性能的驗證，并不只是。我國GMP第八條規(guī)定：藥品生產(chǎn)企業(yè)必?；詈洼o助區(qū)的總體布局應(yīng)合理，不得互相妨礙。員的選擇論證，也應(yīng)視為驗證計劃的一部分。廠房與設(shè)施設(shè)計的基本出發(fā)點是符合GMP要求及有關(guān)的技術(shù)法規(guī)。設(shè)計說明書進行論證．進行初步確認，待修改后形成正式文件報有關(guān)部門批準。有對人體有害的污染物質(zhì)需進行處理及隔離）的技術(shù)，稱之為污染控制技術(shù)，或潔凈技術(shù)。廠房設(shè)施的性能確認，主要是對HVAC系統(tǒng)能否達到規(guī)定的潔凈度做出判斷。最好請藥品監(jiān)督管理部門或GMP認證管理機構(gòu)組織專

　　

【正文】 個以上的菌落重疊，可分辨時仍以 2 個或 2 個以上菌落計數(shù)。 5)注意事項 ? 使用前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、污染或破損的，不能使用。 ? 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。 ? 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細記錄。 ? 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細 觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。 測試規(guī)則 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。浮游菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）應(yīng)經(jīng)過消毒，溫度、相對濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定位內(nèi)。 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2 人。 測試開始的時間：對單向流，如 100 級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 10min 后開始； 對非單向流，如 10000 級、 100000 級、 300000 級的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 30min 后開始。 浮游菌濃度計算 1)采樣點數(shù)量及其布置 浮游菌測試的最少采樣點數(shù)目分為日常監(jiān)測及環(huán)境驗證兩種情況，最少采樣點數(shù)目見 下 表 。 17 最少采樣點數(shù)目表 面積（ S） m2 100 10000 100000 驗證 監(jiān)測 驗證 監(jiān)測 驗證 監(jiān)測 S10 23 1 2 1 2 — 10≤ S20 4 2 2 1 2 — 20≤ S40 8 3 2 1 2 — 40≤ S100 16 4 4 1 2 — 100≤ S200 40 — 10 — 3 — 200≤ S400 80 — 20 — 6 — 400≤ S 160 — 40 — 13 — 注： ，對于 100 級的單向流 潔凈 室（包括層流工作臺），指的是送風(fēng)口面積；對于 l0000級、 I00000 級的非單向流潔凈室，指的是房間面積。 2 日 常監(jiān)測的采樣點數(shù)目由 生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵操作點來確定。 對每個 100 級潔凈操作區(qū)域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開口處 30cm 設(shè)測點， 每 班 1 次。 對每個 10000 級潔凈工作區(qū)域（如 藥物開口工作區(qū)）可在工作面處設(shè)測點， 每 班 1 次。 采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。工作區(qū)測點位置離地 ~（略高于工作面）；送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)面 30cm 左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。 潔凈室〔區(qū)）采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中或某局部區(qū)域過于稀疏。如 下 圖所示采樣點布置可作參考。 采 樣點布置 參考圖 采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境驗證確定，每次最小采樣量見 下 表 。 每次最小采樣量表 潔凈度級別 采樣量， L 日常監(jiān)測 環(huán)境驗證 100 級 600 1000 10000 級 400 500 100000 級 50 100 2） 采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣 1 次。 3） 采樣注意事項：①對于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上；②布置采樣點時，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口 Im 以上；③采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。 4） 測試報告測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。測試報告的格 18 式如 下 表。 浮游菌測試報告表 測試單位 測試日期 測試依據(jù) 生產(chǎn)批號 測試區(qū)域 房間或?qū)恿鞴ぷ髋_ 潔凈度級別 面積（ m2） 測試狀態(tài) 溫度（ ℃ ） 相對濕度（ %） 靜壓差（ Pa） 采集器名稱 培養(yǎng)基名稱 采集器型號 送風(fēng)口 工作區(qū) 采樣點編號 No. 采樣速率（ L/min） 采樣量（ m3） 開始時間 菌落數(shù)（ CFU） 平均濃度（ CFU/ m3） 最高濃度（ CFU/ m3） 最低濃度（ CFU/ m3） 評定標準 結(jié)論 測試人 報告人 批準人 日期 日期 日 期 5）結(jié)果計算 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)；每個測點的浮游菌平均濃度的計算， 平均濃度（個／ m3）＝ 菌落數(shù) /采樣量 例 1：某測點采樣量為 400L.，菌落數(shù)為 1，則：平均濃度 = 1/ = 個 /m3 例 2：某測點采樣量為 2 m3，菌落數(shù)為 3，則： 平均濃度 = 3/2 = 1..5 個 /m3 6） 結(jié)果評定 用浮游菌平均濃度判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。 ① 每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標準中關(guān)于細菌濃度的界限。在我國以 GMP（ 1998）附錄一的標準為據(jù)。 ②若某側(cè)點的 浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新采樣2 次， 2 次側(cè)試結(jié)果必須合格。 三 沉降菌的測定 沉降菌（ settling microbe）是用標準提及的方法（沉降暴露法）收集到的活微生物粒子．通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。此處標準為 GB/T16294 1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》。其沉降濃度用 CFU/皿 (30min）表示。此外，用擦拭法收集培養(yǎng)的建筑物表面（墻壁、地板、天花板等）以及操作人員衣著上的細菌亦屬于沉降菌測試的內(nèi)容。該標準的主要內(nèi)容如 下： 本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若 干 時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室〔區(qū)）的潔凈度。 沉降菌測定所用設(shè)備主要為高壓消毒鍋、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿（ Ф 90mrn x 15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿）和培養(yǎng)基（普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其他培養(yǎng)基）。 測試 步驟 1） 采樣方法 ： 將已制備好的培養(yǎng)皿按要求放置，打開 培 養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露 ，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒 置。 2）培養(yǎng) ： 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于 3035℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗（每批選定 3 只培養(yǎng)皿），檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。 3） 菌落計數(shù) ： 用肉眼直接計數(shù)，標記或者菌落計數(shù)器上點計，然后用 510 倍放大鏡檢 19 查有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有 2 個或 2 個以上菌落重疊，可分辨時仍以 2 個或 2 個以上菌落計數(shù)。 注意事項 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性；采取一切措施防止人為對樣 本的污染；對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù) 做 詳細的記錄；由于細菌種類繁多，差別甚大 ， 計數(shù) 時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。 測試規(guī)則 1） 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，側(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。沉降菌測試前，被測試潔凈室應(yīng)經(jīng)過消毒，溫濕度應(yīng)達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。 2） 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服；靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于 2 人。 3） 測試時間對單向流，如 100 級凈化房間及層流工作臺 ，測 試應(yīng)在凈化空凋系統(tǒng)正常運行不少于 10min 后開始；對非單向，如 10000 級、 100000 級以上的凈化房間 ，測 試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 30min 后開始。 4） 沉降菌計數(shù)沉降法的最少采樣點數(shù)與懸浮粒子測試方法的采樣點數(shù)相同 。 可按 下 表 來確定。在滿足最少采樣點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù) 。 最少培養(yǎng)皿數(shù)參考表 潔凈度級別 所需 Ф 90mm 的培養(yǎng)皿數(shù)（沉降 計） 100 14 10000 2 100000 2 5） 采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。工作區(qū)采樣點的位置離地 ~｛略高于工作面）；可在關(guān)鍵 設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。 沉降菌測試法采樣點位置的詳細規(guī)則與浮游菌測試法的采樣點位置規(guī)則類同 。 測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度壓差及測證心伏態(tài)。測試報告的編寫格式見 下 表 。 沉降菌測試報告表 編號 測試單位 測試狀態(tài) 環(huán)境溫度 相對濕度 測試依據(jù) 培養(yǎng)基名稱 培養(yǎng)溫度 ℃ 靜壓差 Pa 培養(yǎng)基批號 檢測日期 報告日期 培養(yǎng)皿 區(qū)域 1 2 3 4 平均數(shù) 級別 備注 評定標準 結(jié)論 檢驗人 日期 復(fù)核人 日期 6)結(jié)果計算 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。 平均菌落數(shù)的計算： 12M nM M Mn? ? ?? …平 均 菌 落 數(shù) 式中， M 為平均菌落數(shù)； M1為 1 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； M2為 2 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； Mn為 n 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； n 為培養(yǎng)皿總數(shù)。 7） 結(jié)果評定 。 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準；若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然 后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。 20 第七節(jié) 潔凈室消毒的驗證 制藥工業(yè)的潔凈室（特別是無菌藥品生產(chǎn)），不僅要控制空氣中一般的懸浮狀態(tài)的氣溶膠粒子，還要控制活微生物數(shù)。針對兩種污染形式（微粒和微生物），要對可能造成污染的途徑（空氣、水、表面、物料及人員）進行控制。與控制廠房設(shè)施污染有關(guān)的主要是空氣與表面。 一 對潔凈室的消毒及其方法 潔凈室要獲得相對“無菌”的空氣，主要應(yīng)用對靜止環(huán)境內(nèi)空氣滅菌法，以及對流動空氣的過濾除菌法；兩者應(yīng)結(jié)合應(yīng)用。制藥企業(yè)可以利用加熱（干熱、濕熱）、化學(xué)藥物 （ 如甲醛、環(huán)氧乙烷、臭氧） 射線（如紫外線燈照射）等方法，使空氣中細菌的蛋白質(zhì)變性以滅菌；可以利用過濾介質(zhì)（如各類空氣過濾器、高效過濾器）或靜電除塵法將空氣中塵埃、微生物粒子予以捕集截留。從理論上說，經(jīng) HVAC 系統(tǒng)處理送入潔凈室的空氣， 可以使房間的活微生物數(shù)控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。而在實際生產(chǎn)中，由于機器的運行、人員的進出，建筑物的表面均會產(chǎn)生塵粒，從而滋生細菌并極易再吹落；特別是人員的污染幾乎是 唯一 的細菌來源，一個人每小時約散發(fā) 1000 個死皮細胞（相當(dāng)于 20 微米 大小的粒子〕，因此人身凈化必須 嚴格按 SOP 執(zhí)行（人手需經(jīng)消毒液浸泡或噴灑）； 無菌室的室內(nèi)建筑材料、設(shè)施設(shè)備等應(yīng)能經(jīng)受藥物的消毒滅菌處理；潔凈服的質(zhì)地應(yīng)光滑、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì)，也就是要選用不產(chǎn)生靜電或經(jīng)防靜電處理的材料；潔凈服的洗滌、干燥、整理，必須在潔凈室環(huán)境中進行，必要時應(yīng)按要求滅菌（無菌衣必須經(jīng)高溫消毒滅菌）；物料、容器、設(shè)備、儀器進人無菌室應(yīng)做嚴格的消毒滅菌處理；定期進行室內(nèi)消毒滅菌操作，等等，以使?jié)崈羰以趧討B(tài)狀態(tài)下也符合 GMP 的規(guī)定要求。 我國 GMP（ 1998）第 55 條規(guī)定，潔凈室（區(qū)）應(yīng)定期消毒。定期進行室內(nèi)消毒滅菌需要時間，設(shè)備的清洗滅菌也需要時間，因 此潔凈室（特別是無菌室）一般不安排三班生產(chǎn)，每天必須有足夠時間用于清潔與消毒。 對于潔凈室的地面、墻面、頂棚表面、設(shè)備的表面、人體衣服表面等，都要采取合適的清潔、消毒的方法。而對于主要污染途徑的表面，常見的消毒滅菌方法有：紫外線燈照射，臭氧接觸，過氧乙酸、甲醛、乳酸等氣體熏蒸，消毒劑噴灑等。 清潔和滅菌是解決微粒與微生物污染的主要手段，但必須保證清潔與滅菌的徹底性。制藥企業(yè)必須制定清潔和滅菌的標準操作規(guī)程（ SOP），并定期進行驗證，以確證清潔與滅菌的有效性。我國 GMP（ 1998）第 49 條明確規(guī)定：“藥品生產(chǎn) 車間、工序、崗位均應(yīng)按生產(chǎn)和空氣潔凈度級別的要求制定廠房、設(shè)備、容器等清潔規(guī)程，內(nèi)容應(yīng)包括：清潔方法、程序、間隔時間，使用的清潔劑或消毒劑，清潔工具的清潔方法和存放地點。”在附錄一第 4 點中強調(diào)了設(shè)備清洗是必要的驗證內(nèi)容之一。 清潔與滅菌往往是聯(lián)系在一起的，總是在房間清潔之后再進行消毒，消毒之后再次清潔。對于消毒滅菌需要驗證的內(nèi)容有：消毒條件、方法、所有介質(zhì)、清潔劑、滅菌劑及濃度、消毒設(shè)備、消毒時間以及最后的環(huán)境監(jiān)測。 臭氧滅菌消毒 臭氧（ O3）具有強烈的滅菌消毒作用，且不存在任何有毒殘留物，近年來為制藥 企業(yè)廣泛應(yīng)用。 臭氧滅菌消毒的原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解為氧分子（姚）和單個氧原子（ O），后者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將細菌殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通氧分子（ O2），不存在任何有毒殘留物 。 稱無污染消毒劑。 臭氧不僅對各種細菌（如大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）、肝炎病毒等有極強的殺滅能力，面且對霉菌也有很強的殺滅能力。 生產(chǎn)臭氧的原料主要是空氣和電能，一般通過高頻臭氧發(fā)生器來制取。消毒