【導(dǎo)讀】術(shù)，隨著不斷改進(jìn)與發(fā)展，目前已成為應(yīng)用極為廣泛的化學(xué)分離分析的重要手段。度檢測(cè)器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的特點(diǎn)。為了更好地了解高效。了高壓輸液設(shè)備，流速最高可達(dá)103cm·離苯的羥基化合物，7個(gè)組分只需1min就可完成?；岱蛛x，用經(jīng)典色譜法，柱長(zhǎng)約170cm，柱徑，較低的化合物，它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20％。有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運(yùn)載作用。相對(duì)組分作用的劇烈競(jìng)爭(zhēng)。數(shù)，這為選擇最佳分離條件提供了極大方便。進(jìn)，因此得到迅猛的發(fā)展。后從控制器的出口流出。阻力很大，為使流動(dòng)相較快流動(dòng)，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。常用的輸液泵分為恒流泵和恒壓泵兩種。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。稱柱外效應(yīng)）較突出。證分離技的性能不受影響。內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。主要缺點(diǎn)是對(duì)溫度變化敏感，并且不能用于梯度淋洗。其中梯度淋洗裝置是高壓液相色譜。擴(kuò)大應(yīng)用范圍，它是目前最廣泛使用的一種固定相。

　　

【正文】 數(shù)，有可能提供分子結(jié)構(gòu)的某些信息。(2)保留時(shí)間短，譜峰窄，易檢測(cè)，可采用靈敏度較低的檢測(cè)器 （ 3） 固定相與分子間作用力極弱，趨于零。由于柱子不能很強(qiáng)保留分子，因此柱壽命長(zhǎng)。 （ 4） 不能分辨分子大小相近的化合物，相對(duì)分子質(zhì)量差別必須大于 10％才能得以分離。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 1． 分離原理 尺寸排阻色譜是按分子大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。其固定相為化學(xué)情性多孔物質(zhì) —— 凝膠，它類似于分子篩，但孔徑比分子篩大。凝膠內(nèi)具有一定大小的孔穴， 體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早地被淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內(nèi)，最后洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本上按其分子大小，排阻先后由柱中流出。其滲透過程模型見圖 207。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 2． 固定相 排阻色譜固定相種類很多，一般可分為軟性、半剛性和剛性凝膠三類。表 206列出了常用的一些固定相。 所謂凝膠 ， 指含有大量液體 （ 一般是水 ） 的柔軟而富于彈性的物質(zhì) ， 它是一種經(jīng)過交聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體 。 （ 1） 軟性凝膠 如葡聚糖凝膠 、 瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯(lián)結(jié)構(gòu) ， 其微孔能吸入大量的溶劑 ， 并能溶脹到它們干體的許多倍 。 它們適用以水溶性溶劑作流動(dòng)相 ， 一般用于小分子質(zhì)量物質(zhì)的分析 ， 不適宜用在高效液相色譜中 。 （ 2） 半剛性凝膠 如高交聯(lián)度的聚苯乙烯 （ Styragel） 比軟性凝膠稍耐壓 ， 溶脹性不如軟性凝膠 。 常以有機(jī)溶劑作流動(dòng)相 。用于高效液相色譜時(shí) ， 流速不宜大 。 （ 3） 剛性凝膠 如多孔硅膠 、 多孔玻璃等它們既可用水溶性溶劑 ， 又可用有機(jī)溶劑作流動(dòng)相 ， 可在較高壓強(qiáng)和較高流速下操作 。 一般控制壓強(qiáng)小于 7MPa， 流速＜ 1cm3s1；否則將影響凝膠孔徑 ， 造成不良分離 。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 3．流動(dòng)相 排阻色譜所選用的流動(dòng)相必須能溶解樣品，并必須與凝膠本身非常相似，這樣才能潤(rùn)濕凝膠。當(dāng)采用軟性凝膠時(shí)，溶劑也必須 能溶脹凝膠 。另外，溶劑的粘度要小，因?yàn)楦哒扯热軇┩拗品肿訑U(kuò)散作用而影響分離效果。這對(duì)于具有低擴(kuò)散系數(shù)的大分子物質(zhì)分離，尤需注意。選擇溶劑還必須與檢定器相匹配。常用的流動(dòng)相有四氫呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水等。 以水溶液為流動(dòng)相的凝膠色譜適用于水溶性樣品，以有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的凝膠色譜適用于非水溶性樣品。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 (八 )親和色譜法（ AC）簡(jiǎn)介 親和色譜是利用生物大分子和固定相表面存在某種特異性親和力 ， 進(jìn)行選擇性分離的一種方法 。 它通常是在載體 （ 無機(jī)或有機(jī)填料 ） 表面先鍵合一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂 （ 如環(huán)氧 、 聯(lián)氨等 ） ；隨后 ， 再連接上配基 （ 酶 、 抗原或激素等 ） 。 這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子相互作用而被保留 ， 沒有這種作用的分子不被保留 。 圖 209為親和色譜法示意圖 。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 （九）分離類型的選擇 1．根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量選擇 相對(duì)分子質(zhì)量十分低的樣品，其揮發(fā)性好，適用于氣相色譜。標(biāo)準(zhǔn)液相色譜類型（液一固、液一液、及離子交換色譜）最適合的相對(duì)分子質(zhì)量范圍是 20O～ 2020。對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量大于 2020的樣品，則用尺寸排阻法為最佳。 2． 根據(jù)溶解度選擇 弄清樣品在水 、 異辛烷 、 苯 、 四氯化碳 、 異丙醇中的溶解度是很有用的 。 如果樣品可溶于水井屬于能離解物質(zhì) ， 以采用離子交換色譜為佳；如樣品可溶于烴類 （ 如苯或異辛烷 ） ， 則可采 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 表 207液相色譜分離類型選擇參考表 溶于水 ——排阻色譜 ， 水為流動(dòng)相 相對(duì)分子質(zhì)量 ＞ 2020 不溶于水 ——排阻色譜 ， 非水流動(dòng)相 同系物 ——分配色譜 不溶于水 異構(gòu)體 ——吸附色譜 樣品 分子大小差異 ——排阻色譜 反相液一液色譜 相對(duì)分子質(zhì)量 溶于水 ， 不離解 ＜ 2020 排阻色譜 ， 水為流動(dòng)相 堿 ——陽(yáng)離子交換色譜 溶于水 ， 可離解 酸 ——陰離子交換色譜 溶于水， 離子與非離子 — 反相離子對(duì)色譜 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 用液一固吸附色譜；如樣品溶解于四氯化碳，則多采用常規(guī)的分配和吸附色譜分離；如樣品既溶于水又溶于異丙醇時(shí)，常用水和異丙醇的混合液作液一液分配色譜的流動(dòng)相，以憎水性化合物作固定相。 3． 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇 用紅外光譜法 ， 可預(yù)先簡(jiǎn)單地判斷樣品中存在什么官能團(tuán) 。然后 ， 確定采用什么方法合適 。 例如 ， 酸 、 堿化合物用離子交換色譜；脂肪族或芳香族用液一液分配色譜 、 液一固吸附色譜；異構(gòu)體用液一固吸附色譜；同系物不同官能團(tuán)及強(qiáng)氫鍵的用液一液分配色譜 。 現(xiàn)列出表 207作為選擇分離類型的參考。 來自 中國(guó)最大的資料庫(kù)下載 思考題 1． 現(xiàn)需分離分析一氨基酸試樣 ， 擬采用哪種色譜 ？ 2． 提高液相色譜中柱效的最有效途徑是什么 ？ 3. 何謂反相液相色譜 ？ 何謂正相液相色譜 ？ 4. 在液相色譜法中 ， 梯度淋洗適用于分離何種試樣 ？ 5. 在液相色譜中 ， 范氏方程中的哪一項(xiàng)對(duì)柱效能的影響可以忽 略不計(jì) ？ (p369) 6. 對(duì)下列試樣 ， 用液相色譜分析 ， 應(yīng)采用何種檢測(cè)器： （ l） 長(zhǎng)鏈飽和烷烴的混合物 （ 2） 水源中多環(huán)芳烴化合物 。 7. 對(duì)聚苯乙烯相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行分級(jí)分析 ， 應(yīng)采用哪一種液相色譜法 ？ 8． 什么是化學(xué)鍵合固定相 ？ 它的突出優(yōu)點(diǎn)是什么 ？ 9． 什么叫梯度洗脫 ？ 它與氣相色譜中的程序升溫有何異同 ？ ， 最適宜分離的物質(zhì) 。 （ l） 氣液色譜； (2) 正相色譜； （ 3） 反相色譜； （ 4） 離子交 換 色譜 。（ 5） 凝膠色譜； (6） 氣固色譜； (7） 液固色譜 。