3蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法(編輯修改稿)
2025-10-04 01:12 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 CHR O=C Cu C=O HN NH RCH CHR H2O 紫色絡(luò)合物 第十八頁(yè)，共三十五頁(yè)。 原 理 雙縮脲法是利用蛋白質(zhì)的雙縮脲反響而測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法。因蛋白質(zhì)含有兩個(gè)以上的肽鍵，所以有雙縮脲反響。在堿性溶液中蛋白質(zhì)與 Cu2+形成紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān)。 在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，未知樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液同時(shí)反響，并于540~560nm測(cè)定，即可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。 第十九頁(yè)，共三十五頁(yè)。 試劑 一 試劑 1．標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液〔 5mg/ml〕 用 ： 5g酪蛋白加 液至 1 000ml。 2．雙縮脲試劑 溶解 〔 CuSO4 5H2O〕和 g酒石酸鉀鈉〔 NaKC4H4O6 4H2O〕于 500ml蒸餾水中。在攪拌下參加 10% NaOH溶液 300ml，用蒸餾水稀釋到 1升，貯存在內(nèi)壁涂有石蠟的瓶中，可長(zhǎng)期保存。 3．未知蛋白質(zhì)溶液 γ–球蛋白溶液。 第二十頁(yè)，共三十五頁(yè)。 Folin－酚試劑法〔 Lowry法〕 蛋白質(zhì)在堿性溶液中其肽鍵與 Cu2+螯合，形成蛋白質(zhì)一銅復(fù)合物，此復(fù)合物使酚試劑的磷鉬酸復(fù)原，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，在一定條件下，利用藍(lán)色深淺與蛋白質(zhì)濃度的線性關(guān)系作標(biāo)準(zhǔn)曲線并測(cè)定樣品中蛋白質(zhì)的濃度。該化合物在 750nm有最大吸收峰。 第二十一頁(yè)，共三十五頁(yè)。 試劑：一： 1， 4%碳酸鈉； 2， ；3， 1%硫酸銅； 4,2%酒石酸鉀鈉。 1和 2等體積混合， 3和 4等體積混合，然后將兩液以 50： 1混合
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