3蛋白質濃度測定方法(編輯修改稿)
2025-10-04 01:12 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 CHR O=C Cu C=O HN NH RCH CHR H2O 紫色絡合物 第十八頁，共三十五頁。 原 理 雙縮脲法是利用蛋白質的雙縮脲反響而測定蛋白質含量的方法。因蛋白質含有兩個以上的肽鍵，所以有雙縮脲反響。在堿性溶液中蛋白質與 Cu2+形成紫紅色絡合物，其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸成分無關。 在一定的實驗條件下，未知樣品溶液與標準蛋白質溶液同時反響，并于540~560nm測定，即可以通過標準蛋白質的標準曲線求出未知樣品的蛋白質濃度。 第十九頁，共三十五頁。 試劑 一 試劑 1．標準酪蛋白溶液〔 5mg/ml〕 用 ： 5g酪蛋白加 液至 1 000ml。 2．雙縮脲試劑 溶解 〔 CuSO4 5H2O〕和 g酒石酸鉀鈉〔 NaKC4H4O6 4H2O〕于 500ml蒸餾水中。在攪拌下參加 10% NaOH溶液 300ml，用蒸餾水稀釋到 1升，貯存在內(nèi)壁涂有石蠟的瓶中，可長期保存。 3．未知蛋白質溶液 γ–球蛋白溶液。 第二十頁，共三十五頁。 Folin－酚試劑法〔 Lowry法〕 蛋白質在堿性溶液中其肽鍵與 Cu2+螯合，形成蛋白質一銅復合物，此復合物使酚試劑的磷鉬酸復原，產(chǎn)生藍色化合物，在一定條件下，利用藍色深淺與蛋白質濃度的線性關系作標準曲線并測定樣品中蛋白質的濃度。該化合物在 750nm有最大吸收峰。 第二十一頁，共三十五頁。 試劑：一： 1， 4%碳酸鈉； 2， ；3， 1%硫酸銅； 4,2%酒石酸鉀鈉。 1和 2等體積混合， 3和 4等體積混合，然后將兩液以 50： 1混合
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