雙波長法快速測定蛋白質含量(編輯修改稿)
2024-10-03 21:59 本頁面
【文章內容簡介】 sitivit y of t he assay about 20 fold ,also make a lot of samples be detected in one cycle. Conclu2而當它與蛋白質結合時變成蘭色。因此考馬斯1. 2 染料的配制 :將 100mg考馬斯亮蘭溶解在靈5540分光光度計廠 , 752C)在 460～ 700nm波長內 ,每10nm檢測樣品的透光率 ,換算成吸收度 ,根據吸收度 波長繪制吸收光譜圖。1. 4 蛋白質測定 :方法同上 ,樣品和染料用量減少1/ 4。用酶標儀 (Bio Rad ,model550)代替紫外 可見分光光度計作為檢測儀 ,酶標檢測板作為反應池 ,檢測特定波長下不同蛋白濃度產生的吸收度。2 結果2. 1 吸收光譜 : 0. 8ml稀釋的染料加入 0. 2ml5mg/ ml的牛血清蛋白 ,使考馬斯亮蘭完全與蛋白結合 ,在 360～700nm內每相隔 10nm檢測待定樣品的吸收度。根據吸收度 波長繪制考馬斯亮蘭 蛋白質結合物吸收光譜 (圖 la) 。以稀釋的染料為待測樣本 ,繪制游離考馬斯亮蘭染料的吸收光譜 (圖 lb)。ACTA ACADEMIA E MEDICINA E SU ZHOU 2000 。20 (1)從吸收光譜圖可知 ,考馬斯亮蘭 蛋白質結合物的最大吸收波長為 590nm ,考馬斯亮蘭染料的最高吸收波長為 460nm ,590nm波長下游離考馬斯亮蘭染料也有較高的吸收度 ,而 460nm處染料 蛋白質結合物無吸收度。2. 2 蛋白質檢測的線性范圍 :為了適合酶標儀濾光片的檢測 ,以 595nm和 450nm作為檢測波長 ,將 BSA從 1mg倍比稀釋至 240pg/ ml ,以檢測樣品在各濃度 C時的吸收度。分別以 A595 C ,A450 C和 A595/ A450 C作圖 ,觀察單波長吸收度和雙波長吸收度之比與蛋白質濃度的線性關系。由圖 2可知 ,A595和 A595/ A450在一定范圍內和蛋白質濃度成正比關系 ,A450和蛋白質濃度無正相關。A595/ A450在線性范圍內隨蛋白質濃度的變化比 A595靈敏。為了明確 A595/ A450雙波長法檢測范圍 ,通過局部放大作圖 3。
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