蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的測定(編輯修改稿)
2025-06-18 11:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一管的 pH即為酪蛋白的等電點(diǎn) 。 二、等電聚焦電泳 原理： 1）有一類兩性電解質(zhì)：它具有依次遞變而又相差不大的等電點(diǎn)，在電場下形成遞變而又連續(xù)的 pH梯度，故在電泳介質(zhì)中加入這種物質(zhì)則能造成介質(zhì) pH由酸到堿逐步變化。 2)各種蛋白質(zhì) pI不同 3）兩性電解質(zhì)載體在電場作用下，按各自 pI形成從陽極到陰極逐漸增加的連續(xù)而穩(wěn)定的 pH梯度 以聚丙烯酰胺凝膠為電泳支持介質(zhì)，并在凝膠中加入兩性電解質(zhì)載體，在電場作用下，蛋白質(zhì)在此 pH梯度的凝膠中泳動(dòng)，當(dāng)遷移至 pH值等于 pI處時(shí)，就不再泳動(dòng)，而被濃縮成狹窄的區(qū)帶 。 三、實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 1）兩性電解質(zhì) 2） 30％丙烯酰胺溶液 3） TEMED 4） 10％過硫酸銨溶液 5）負(fù)極緩沖液： NaOH 6) 正極緩沖液： 磷酸或硫酸 7) 固定液： 10％（ W/V）三氯乙酸 8) 染色液 9) 脫色液 10) 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn) 11) 電泳儀 12) 圓盤電泳槽 圖 聚丙烯酰胺凝膠圓盤電泳示意圖 (A為正面 ,B為剖面 ) 四 、 操作方法 1. 凝膠柱的制備 （ 1）玻璃管的一端插在橡
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