蛋白質(zhì)和氨基酸的測定(編輯修改稿)
2025-05-28 18:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ? 在標定和使用標準滴定溶液時 ， 滴定速度一般應保持在 6～ 8 mL/min。 鹽酸標準滴定溶液的濃度 [c(HCl)] mol/L 工作基準試劑無水碳酸鈉的質(zhì)量 m/g 1 ?制備標準滴定溶液的濃度值應在規(guī)定濃度值的 177。 5%范圍以內(nèi)。 ?標準滴定溶液的濃度小于等于 mol/L時，應于臨用前將濃度高的標準滴定溶液用煮沸并冷卻的水稀釋，必要時重新標定。 ?除另有規(guī)定外，標準滴定溶液在常溫 15～ 25℃ 下保存時間一般不超過兩個月。當溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀、顏色變化等現(xiàn)象時，應重新制備。 ?貯存標準滴定溶液的容器，其材料不應與溶液起理化作用，壁厚最薄處不小于 mm。 （ GB/T 6012022 化學試劑 標準滴定溶液的制備 ） 配制 按下表的規(guī)定量取硫酸 ， 緩緩往入 1000 mL水中 ， 冷卻 ， 搖勻 。 標定 按下表的規(guī)定稱取于 270～ 300 ℃ 高溫爐中灼燒至恒重的工作基準試劑無水碳酸鈉 ， 溶于 50 mL水中 ， 加 10滴溴甲酚綠 甲基紅指示液 ，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色 ， 煮沸 2 min， 冷卻后繼續(xù)滴定至溶液再呈暗紅色 。 同時做空白試驗 。 硫酸標準滴定溶液的濃度 [c(1/2H2SO4)] mol/L 硫酸的體積 V /mL 1 30 15 3 硫酸標準滴定溶液的濃度 [c(1/2H2SO4)]/ mol/L 工作基準試劑無水碳酸鈉的質(zhì)量 m/g 1 硫酸 標準滴定溶液 [c(1/2H2SO4)= mol/L] 溴甲酚綠－甲基紅 指示液 （ GB/T 《 食品中蛋白質(zhì)的測定 》 第一法 ） （ GB/T 6032022 化學試劑 試驗方法中所用制劑及制品的制備 ） 溶液 I： 稱取 溴甲酚綠，溶于乙醇 (95%)，用乙醇 (95%)稀釋至 100 mL。 溶液 Ⅱ ： 稱取 g甲基紅，溶于乙醇 (95%)，用乙醇 (95%)稀釋至 100 mL。 取 30 mL溶液 I、 10 mL溶液 Ⅱ ，混勻。 消化 蒸餾 吸收 滴定 凱氏定氮法 ④ 步驟 總反應式： 2NH2（ CH2） 2COOH + 13H2SO4 （ NH4） 2SO4 + 6CO2 + 12SO2 + 16H2O （一定 要用濃 硫酸 98%） 樣品消化 1 加 硫酸鉀 作為增溫劑，提高溶液沸點，純硫酸沸點 340℃ ，加入硫酸鉀之后可以提高至 400℃ 以上。也可加入 硫酸鈉，氯化鉀等提高沸點，但效果不如硫酸鉀。 為縮短消化時 間 硫酸銅 作為催化劑同時作為消化終點指示劑 。 也可加氧化汞 、 汞 （ 均有毒 ， 價格貴 ） 、 硒粉 、 二氧化鈦 。 所以有機物全部消化后 ， 出現(xiàn)硫酸銅的蘭綠色 ， 它具有催化功能 ， 還可以作為堿性反應指示劑 。 氧化劑 如雙氧水、次氯酸鉀等加速有機物氧化速度。 樣品消化 要注意防止爆沸 消化液 + 40%氫氧化鈉加熱蒸餾，放出氨氣。 2NaOH +（ NH4） 2SO4 2NH3 + Na2SO4 + H2O 蒸 餾 蒸餾 : 一：加入氫氧化鈉溶液要過量 。 二：要防止樣液中氨氣逸出。 1 用 4%硼酸吸收，用鹽酸標準溶液滴定，指示劑用混合指示劑（甲基紅 — 溴甲基酚綠混合指示劑）國標用亞甲基蘭 +甲基紅。 指示劑 紅色 綠色 紅色 （酸） （堿） （酸） 吸收 滴定 吸收 與滴定 2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2B4O7 (NH4)2B4O7 + 5H2O + 2HCl 2NH4Cl + 4H3BO3 2 用過量的 H2SO4 或 HCl標準溶液吸收，再用 NaOH 標準溶液滴定過剩的酸液，用甲基紅指示劑。 凱氏定氮法 分析步驟 再次說明 （ 一 ） 試樣處理 稱樣 (約相當?shù)?30 ～ 40 mg) （ 1）固體試樣： ～ g （ 2）半固體試樣 ： ～ g （ 3）液體試樣： ～ mL 消化準備 將試樣移入洗凈、烘干、編號的100 mL或 500 mL的凱氏燒瓶內(nèi) ，加入 g硫酸銅， 6 g硫酸鉀及 20 mL硫酸，加入 2粒～ 3粒玻璃珠，稍搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以 45176。 角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。 GB/T 《 食品中蛋白質(zhì)的測定 》 第一法） 消化 將準備好的凱氏燒瓶以 45176。 斜放于溫控電爐上（先墊上石棉網(wǎng)），開始用微火小心加熱，（小心瓶內(nèi)泡沫沖出而影響結(jié)果?。?，待內(nèi)容物全部炭化 ,泡沫完全停止，瓶內(nèi)有白煙冒出后，升至中溫，白煙散盡后升至高溫，加強火力 ,并保持瓶內(nèi)液體微沸 ,（為加快消化速度 ,可分數(shù)次加入 10 mL 30%過氧化氫溶液，但必須將燒瓶冷卻數(shù)分鐘以后加入?。?,經(jīng)常轉(zhuǎn)動燒瓶，觀察瓶內(nèi)溶液顏色的變化情況，當燒瓶內(nèi)容物的顏色逐漸轉(zhuǎn)化成藍綠色澄清透明后， 再繼續(xù)加熱 ～ 1h。然后取下并使之冷卻。 消 化 （若凱氏燒瓶壁粘有碳化粒時，進行搖動或待瓶中內(nèi)容物冷卻數(shù)分鐘后，用過氧化氫溶液沖下，繼續(xù)消化至透明為止）。 定容 將消化好并冷卻至室溫的樣品消化液加入 20 mL蒸餾水搖勻放冷，小心轉(zhuǎn)移到 100 mL容量瓶中，再用蒸餾水少量多次洗滌凱氏燒瓶，并將洗液一并轉(zhuǎn)入容量瓶中， 直至燒瓶洗至中性 ，表明銨鹽無損地移入容量瓶中，充分搖勻后， 靜置至室溫 ，加水至刻度線定容，混勻備用。 同樣條件下做一試劑 空白試驗 。 消 化 蒸 餾 （ 二 ） 蒸餾 水蒸汽發(fā)生器的準備： 按要求安裝好定氮裝置 ， 保證管路密閉不漏氣 。于水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至 2/3處 ， 加 甲基紅指示劑 3滴及 3～ 5 mL硫酸 ， 以保持水呈酸性 （ 防止水中含有 N， 加硫酸使成為 (NH4)2SO4形式固定下來 ， 蒸餾中不會被蒸發(fā) ） ， 開通電源加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水 。 蒸 餾 清洗凱氏定氮儀： 打開進氣口 ， 關(guān)閉廢液出口 ， 接通冷凝水 ，
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