【文章內(nèi)容簡介】 察產(chǎn)氣情況，凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽性。 ?（ 5）報(bào)告 ? 根據(jù)證實(shí)為大腸群陽性的管數(shù)，查 MPN的檢索表，報(bào)告每 100mL（ g）大腸菌群的最近似數(shù) (MPN)。 第三節(jié) 大腸菌群的測定 第三節(jié) 大腸菌群的測定 ?二、ＬＴＳＥ快速檢驗(yàn)法 ?１．原理 ? 不同的細(xì)菌以不同途徑分解糖類，在其代謝過程中均能產(chǎn)生丙酮 酸及轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N酸類，大腸菌群能分解乳糖，由于具有甲酸解氫酶作 用于甲酸，產(chǎn)生氫和二氧化碳?xì)怏w，因此氣體的產(chǎn)生是在產(chǎn)酸的同時(shí) 進(jìn)一步分解酸而形成的。根據(jù)這個(gè)原理，將樣品接種到 LTSEBOth內(nèi) 15h， 看結(jié)果有無產(chǎn)氣現(xiàn)象，然后加氧化酶試驗(yàn)和涂片革蘭氏染色鏡檢結(jié)果 綜合判斷是否有大腸菌群的存在 。 第三節(jié) 大腸菌群的測定 ?儀器與材料 ?高壓蒸氣滅菌器 干熱氣菌箱 恒溫箱 天平 均質(zhì)器 顯微鏡 冰箱 接種環(huán) 載玻片 試管、童漢氏小管、刻度吸管等，置于干熱滅菌箱中 160℃ 滅菌 2h。 ? 培養(yǎng)基和試劑 ?LTSE培養(yǎng)基肉湯（ 1號） 氧化酶試劑 革蘭氏染液 ?本方法中，除化學(xué)純（ BR）生化試劑外，所用的化學(xué) 試劑為分析純（ AR）；試劑用水為蒸餾水。 第三節(jié) 大腸菌群的測定 ? 第三節(jié) 大腸菌群的測定 ?一、沙門氏菌檢驗(yàn) ? ? 沙門氏菌胃腸炎是由除傷寒沙門氏菌外任何一型沙門氏菌而所致，潛伏期一般 672小時(shí)，主要癥狀為惡心、嘔吐、腹絞痛、腹瀉、發(fā)熱寒顫頭痛。病程一般 1～ 2天或更長。感染劑量為 15～ 20個(gè)菌，死亡率達(dá) 1～ 4%。最易感群體是年幼兒童、虛弱者、年長老人、免疫缺陷者等。 ? 污染源主要是人和家畜的糞便，沙門氏菌常存在于動物中，特別是禽類和豬。在許多環(huán)境中也有存在。從水，土壤，昆蟲中，從工廠和廚房設(shè)施的表面和動物糞便中已發(fā)現(xiàn)該類細(xì)菌。它們可以存在于多類食品中，包括生肉，禽，奶制品和蛋，魚，蝦和田雞腿，酵母，椰子，醬油和沙拉調(diào)料，蛋糕粉，奶油夾心甜點(diǎn)，頂端配料，干明膠，花生露，橙汁，可可和巧克力 第四節(jié) 常見致病菌的測定 檢樣 前增菌法 直接增菌法 凍肉、蛋品、乳品及其它加工食品 鮮肉、鮮蛋、鮮乳及其它未經(jīng)加工的食品 25g ＋ BP 225mL 25g ＋滅菌生理鹽水 25mL 制成檢樣均質(zhì)液 （ 36177。 1） ℃ 一般 4 h，干蛋品 18～ 24 h 10mL＋ MM(或 TTB)100mL 10mL＋ SC 100mL 檢樣均質(zhì)液的半量＋ MM(或 TTB)100mL 檢樣均質(zhì)液的半量＋ SC 100mL 42℃ 18 ～ 24 h （ 36177。 1） ℃ 18～ 24 h 42℃ 18 ～ 24 h （ 36177。 1） ℃ 18～ 24 h BS DHL(或 HE、 WS、 SS) （ 36177。 1） ℃ 40～ 48 h （ 36177。 1） ℃ 18～ 24 h 挑取可疑菌落 TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、 H2S）、蛋白胨水（靛基質(zhì)）、尿素（ ）、 KCN、賴氨酸 H2S＋靛基質(zhì)－ H2S＋靛基質(zhì)＋ H2S－靛基質(zhì)－ 非如左述的 尿素－ KCN－賴氨酸＋ 尿素－ KCN－賴氨酸＋ 尿素－ KCN－賴氨酸＋ /－ 各種反應(yīng)結(jié)果 甘露醇、山梨醇 ONPG 沙門氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn) 沙門氏菌血清學(xué)實(shí)驗(yàn) 非沙門氏菌 非沙門氏菌 報(bào)告 1）前增菌和增菌 凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。以無菌操作取 25g（ mL），加在裝有 225mL緩沖蛋白胨水的 500mL廣口瓶內(nèi)。固體食品可先應(yīng)用均質(zhì)器以 8000～ 10000r/min打碎 1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，于 36℃ 177。 1℃ 培養(yǎng) 4h (干蛋品培養(yǎng) 18h～ 24h)，移取 10mL，轉(zhuǎn)種于 100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于 42℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h。同時(shí)，另取 10mL，轉(zhuǎn)種于 100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于 36℃ 177。 1℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h。 鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌。各取25g(25mL)加入滅菌生理鹽水 25mL，按前法做成檢樣勻液；取 25mL，接種于 100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于 42℃ 培養(yǎng) 24h；另取 25mL接種于 100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于 36℃ 177。 1℃培養(yǎng) 18h～ 24h。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 2）分離 取增菌液 1環(huán)，劃線接種于一個(gè)亞硫酸鉍瓊脂平板和一個(gè) DHL瓊脂平板 (或 HE瓊脂平板、 WS或 SS瓊脂平板 )。兩種增菌液可同時(shí)劃線接種在同一個(gè)平板上。于 36℃ 177。 1℃ 分別培養(yǎng) 18h～ 24h(DHL、 HE、 WS、 SS)或 40h～ 48h(BS)，觀察各個(gè)平板上生長的菌落。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征 選擇性瓊脂平板 沙門氏菌 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅳ 、 Ⅴ 、 Ⅵ 沙門氏菌 Ⅲ （即亞利桑那菌） BS瓊脂 產(chǎn)硫化氫菌落為黑色帶有金屬光澤，棕 褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色 或棕色；有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成 灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變 黑色帶有金屬光澤 DHL瓊脂 無色半透明，產(chǎn)硫化氫菌落中心帶黑色 或幾乎全黑色 乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與亞 屬 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅳ 、 Ⅴ 、 Ⅵ 相同；乳 糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶 黑色 HE瓊脂 WS瓊脂 藍(lán)綠色或藍(lán)色；多數(shù)菌株產(chǎn)硫化氫，菌 落中心黑色或幾乎全黑色 乳糖陽性的菌株為黃色，中心黑 色或幾乎全黑色；乳糖遲緩陽性 或陰性的菌株為藍(lán)綠色或藍(lán)色， 中心黑色或幾乎全黑色 SS瓊脂 無色半透明，產(chǎn)硫化氫菌株，有的菌落 中心帶黑色，但不如以上培養(yǎng)基明顯 乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與亞 屬 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅳ 、 Ⅴ 、 Ⅵ 相同；乳 糖陽性的菌株為粉紅色，中心黑 色，但中心無黑色形成時(shí)與大腸 埃希氏菌不能區(qū)別 第四節(jié) 常見致病菌的測定 3）生化試驗(yàn) 自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂、蛋白陳水 (供做靛基質(zhì)試驗(yàn) )、尿素瓊脂()、氰化鉀 (KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫竣酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各 1管，于 36℃ 177。 1℃ 培養(yǎng) 18h～ 24h，必要時(shí)可延長至 48h，按生化反應(yīng)初步鑒定表判定結(jié)果。按反應(yīng)序號分類，沙門氏菌屬的結(jié)果應(yīng)屬于 A A2和 B1，其他 5種反應(yīng)結(jié)果均可以排除。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 腸桿菌科各屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 可能的菌屬和種 － ＋ ＋ /－ ＋ 沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸 桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德 華氏菌 ＋ ＋ ＋ /－ ＋ 沙門氏菌 Ⅲ 、弗勞地氏檸檬酸 桿菌、普通變形桿菌 － ＋ ＋ － 沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、 蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌， 普羅菲登斯菌屬 － ＋ － － 傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌、 志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、 蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌， 普羅菲登斯菌屬 ＋ ＋ ＋ /－ － 大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克 雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗 勞地氏檸檬酸桿菌 注：＋陽性；－陰性；＋ /－ 多數(shù)陽性，少數(shù)陰性 第四節(jié) 常見致病菌的測定 腸桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表 反應(yīng)序號 硫化氫 （ H2S） 靛基質(zhì) 氰化鉀 （ KCN） 賴氨酸脫羧酶 判定結(jié)果 A1 ＋ － － － ＋ 沙門氏菌屬 A2 ＋ ＋ － － ＋ 沙門氏菌屬（少見）緩慢愛 德華氏菌 A3 ＋ － ＋ ＋ － 弗勞地氏檸檬酸桿菌、奇異 變形桿菌 A4 ＋ ＋ ＋ ＋ － 普通變形桿菌 B1 － － － － － － － － ＋ － 沙門氏菌屬、大腸埃希氏 菌、甲型副傷寒沙門氏菌 大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬 B2 － － ＋ ＋ －