食品微生物檢驗(yàn)方法(isofda)(編輯修改稿)
2025-03-29 10:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 氏菌 無色 鼠傷寒沙門氏菌 無色 糞鏈球菌 無色 大腸桿菌測定 —— 革蘭氏染色 基本原理： 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師 Gram創(chuàng)立。此法可將細(xì)菌分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌兩大類。 革蘭氏染色的機(jī)理主要是利用兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。 革蘭氏陰性 菌的細(xì)胞壁中含有較多的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用酒精或丙酮酸脫色時，類脂質(zhì)被溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染液的顏色。而 革蘭氏陽性 菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多而且交聯(lián)度大，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此細(xì)胞仍保留初染時的顏色。 大腸桿菌測定 —— 革蘭氏染色 Gram negative Gram positive Gram straining 大腸桿菌測定 —— 革蘭氏染色 基本步驟： ? 將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染液，染 1min，水洗； ? 滴加革蘭氏碘液，作用 1min，水洗； ? 滴加 95%乙醇脫色約 15～ 30s,直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗； ? 滴加番紅復(fù)染液，復(fù)染 1min，水洗、待干、鏡檢。 ? 結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈 紫色 ，革蘭氏陰性菌呈 紅色 。 大腸桿菌測定 —— 生化鑒定 Test positive negative biotype1 biotype2 reagent Indole 紅色環(huán) 不變色 + Kovacs’ MR 紅色 不變色 + + 甲基紅 VP 玫瑰紅色環(huán) 不變色 VP甲、乙液 Citrate 生長 不生長 I M Vi C生化試驗(yàn) 金黃色葡萄球菌 —— 生物學(xué)特性 金黃色葡萄球菌呈球形，直 徑 左右，排列成葡萄 串狀 ，無芽孢，無莢膜。 革蘭氏染色陽性，但衰老、 死亡或被白細(xì)胞吞噬的菌體， 常呈革蘭氏陰性。 金黃色葡萄球菌 —— 生長特性 ? 金黃色葡萄球菌在肉湯中呈渾濁生長，在胰酪胨大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈渾濁生長。 ? 血平板上金黃色葡萄球菌呈金黃色，有時也為白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。 ? BairdParker平板上金黃色葡萄球菌圓形突起、光滑、濕潤，顏色呈灰色到黑色，邊緣淡色，周圍為一渾濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) —— 方法適用性 ? MPN法：適用于檢測帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品。 ? 直接平板計數(shù)法：適用于檢查金黃色葡萄球菌數(shù)不小于 10/g（ ml）的食品。 ? 增菌培養(yǎng)法：適用于檢查含有受損傷的金黃色葡萄球菌的加工食品。 定量方法 定性方法 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) —— 直接平板計數(shù)法 檢樣（ 50g+450mL稀釋液） 適當(dāng)十倍稀釋樣品 選擇 2~3個連續(xù)適宜稀釋度 吸取 1ml菌液按照 、 、 3塊 90mmBairdParker平板上 （做平行試驗(yàn)） 35℃ ， 45~48 h 確證試驗(yàn) 報告 或涂布于 1塊140mm平板上 FDA BAM 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) —— MPN法 檢樣（ 50g+450mL稀釋液） 適當(dāng)十倍稀釋樣品 選擇 3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液， 每個稀釋度接種三管 10% NaCl TSB肉湯 ， 每管接種 1mL 35℃ ， 48 177。 2 h 從生長的管中接種 1環(huán)劃線于 BairdParker平板上 35℃ ， 48 h 確證試驗(yàn) 報告 含 1%丙酮酸鈉 FDA BAM 金黃色葡萄球菌確證試驗(yàn) ? 方法： 從平板上至少挑取 1個可疑金黃色葡萄球菌菌落 ， 移種到TSB/BHI肉湯中 ， 置 35℃ 培養(yǎng) 1824h。 取肉湯培養(yǎng)物 凝固酶試驗(yàn)兔血漿充分混合 ， 置 35℃ 培養(yǎng) ， 定時觀察是否有凝塊形成 ， 至少觀察 6h。 試驗(yàn)中需同時做已知陽性和陰性對照 。 ? 結(jié)果判定： 以內(nèi)容物完全凝固 ， 使試管倒置或傾斜時不流動為陽性 。部分凝固 （ 2+和 3+） 的必須進(jìn)行 生化鑒定 加以證實(shí) 。 FDA BAM金黃色葡萄球菌確證試驗(yàn) ? 對所有的可疑培養(yǎng)物都要進(jìn)行革蘭氏染色 。 ? 過氧化氫酶試驗(yàn) ? 葡萄糖厭氧利用試驗(yàn) ? 甘露醇厭氧利用試驗(yàn) ? 金葡溶菌酶敏感性試驗(yàn) ? 耐熱核酸酶試驗(yàn) （ 輔助 ） Staphylococcus aureus on DNase Agar FDA BAM 2種葡萄球菌和微球菌的典型特性 特性 S. aureus Micrococci 過氧化氫酶 + + + 凝固酶 + 耐熱核酸酶 + 溶菌酶 + + 厭氧利用 葡萄糖 + + 甘露醇 + ISO 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) —— MPN法 檢樣（ xg+9xmL稀釋液） 適當(dāng)十倍稀釋樣品 選擇 3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液， 每個稀釋度接種三管 modified Giolitti and Cantoni broth， 37℃ ， 24~
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