【文章內(nèi)容簡介】 36177。1℃分別培養(yǎng)18～24h，然后根據(jù)表322初步判斷是否為可疑沙門氏菌。表322 腸桿菌科各菌屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果斜面底層產(chǎn)氣H2S可能的菌屬－＋＋/－＋沙門氏菌屬、變形桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬、愛德華氏菌屬＋＋＋/－＋沙門氏菌屬亞屬Ⅲ、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬－＋＋－沙門氏菌屬、埃希氏菌屬、哈夫尼亞菌屬、摩根氏菌屬、普羅菲登斯菌屬－＋－－傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、埃希氏菌屬、哈夫尼亞菌屬、摩根氏菌屬、普羅菲登斯菌屬＋＋＋/－－埃希氏菌屬、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、枸櫞酸桿菌屬該表說明在三糖鐵瓊脂內(nèi)只有斜面產(chǎn)酸并同時H2S陰性的菌株可以排除，其它的反應(yīng)結(jié)果均有沙門氏菌的可能，同時也均有不是沙門氏菌的可能。因此需要做幾項最低限度的實驗。4．5生化試驗在接種三糖鐵的同時，再接種蛋白胨水(供作靛基質(zhì)試驗)、尿素（）瓊脂、KCN培養(yǎng)基和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各一管，于36177。l℃培養(yǎng)1824h，必要時可延長至48小時，按表323判斷結(jié)果。按反應(yīng)序號分類，沙門氏菌屬的結(jié)果應(yīng)屬于AA2和B1，其它五種結(jié)果均可排除。表323 腸桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表反應(yīng)序號H2S靛基質(zhì)尿素KCN賴氨酸脫羧酶判定菌屬A1＋－－－＋沙門氏菌屬A2＋＋－－＋沙門氏菌屬（少見）、愛德華氏菌屬A3＋－＋＋－枸櫞酸桿菌屬、奇異變形桿菌A4＋＋＋＋－普通變形桿菌B1－－－－－－－－＋－沙門氏菌屬、埃希氏菌屬甲型副傷寒沙門氏菌、埃希氏菌屬、志賀氏菌屬B2－－＋＋－－－－＋－埃希氏菌屬埃希氏菌屬、志賀氏菌屬B3－－－－＋/－＋＋＋＋－克雷伯氏菌族各屬陰溝腸桿菌、枸櫞酸桿菌屬B4－＋＋/－＋－摩根氏菌屬、普羅菲登斯菌屬注：（1）三糖鐵瓊脂底層均應(yīng)產(chǎn)酸，不產(chǎn)酸者可排除。斜面產(chǎn)酸與產(chǎn)氣與否均不限。（2）KCN和賴氨酸可選用其中一項，但不能判定結(jié)果，仍需補做另一項。（3）＋陽性、－陰性、＋/－多數(shù)陽性、少數(shù)陰性。（1）反應(yīng)序號A1典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸三項中有一項異常、按表32—3附1仍可判定為沙門氏菌。如有兩項異常，則按A3，判定為枸櫞酸桿菌。表323A 附1 尿素KCN賴氨酸判 定 結(jié) 果－－－甲型副傷寒沙門氏菌（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）－＋＋沙門氏菌 Ⅳ 或 Ⅴ （要求符合本群生化特性）＋－＋沙門氏菌個別變種（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）（2）反應(yīng)序號A2可先做血清學(xué)鑒定，當(dāng)A—F多價血清不凝集時，補作甘露醇和山梨醇，按表32—3附2判定結(jié)果。表323 附2甘露醇山梨醇判 定 結(jié) 果＋＋沙門氏菌屬靛基質(zhì)陽性變種（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果）－－緩慢愛德華氏菌（3）反應(yīng)序號B1三糖鐵斜面產(chǎn)酸的菌株可首先排除，不產(chǎn)酸者可先做血清學(xué)鑒定，當(dāng)A—F多價血清不凝集時，補做鳥氨酸、ONPG、水楊苷、棉子糖和半固體動力試驗，按實驗表32—3附3判定結(jié)果。必要時按表32—4，進(jìn)行沙門氏菌屬亞屬Ⅲ或其它亞屬的鑒定.表323 附3賴氨酸烏氨酸ONPG水楊苷棉子糖動力判定結(jié)果＋＋－－－＋沙門氏菌屬－－－－－－志賀氏菌屬－＋＋－－－宋內(nèi)氏志賀氏菌屬dd＋ddd埃希氏菌屬注：判定結(jié)果時應(yīng)注意傷寒沙門氏菌鳥氨酸陰性，甲型副傷寒沙門氏菌賴氯酸陰性，雞沙門氏菌無動力。表中d表示有不同反應(yīng)結(jié)果。如果未做KCN試驗時，常需做VP試驗（22～250C，4天），哈夫尼亞菌屬為陽性。表324 沙門氏菌屬亞屬的鑒定項目亞 屬ⅠⅡⅢⅣⅤ乳糖－－＋/（＋）－－ONPG－－＋－＋衛(wèi)矛醇＋＋－－＋丙二酸鈉－＋＋－－KCN－－－＋＋水楊苷－－－＋－（＋）遲緩陽性4．6血清學(xué)分型鑒定（1）抗原的準(zhǔn)備％瓊脂斜面培養(yǎng)物作玻片凝集試驗用的抗原。O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的(如2．5～3％)培養(yǎng)基上再檢查，如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應(yīng)時，可挑取菌苔于lmL生理鹽水中作成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時，～％半固體瓊脂平板的中央，待菌落蔓延生長后，在其邊緣部分取菌檢查，～％半固體瓊脂的小玻管1～2次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。（2）抗原的鑒定用A—F多價O血清作玻片凝集試驗，同時用生理鹽水作對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙型菌株，不能分型。被A—F多價O血清凝集者，依次用OOOOOOO和O11因子血清作凝集試驗，根據(jù)試驗結(jié)果判定O群。被OO10血清凝集的菌株，再用OO1O3O19單因子血清作凝集試驗，判定EEEE4各亞群，每一個O抗原成份的最后確定均應(yīng)根據(jù)O單因子血清的檢查結(jié)果，沒有O單因子血清的要用兩個O復(fù)合因子血清進(jìn)行核對。 不被A—F多價O血清凝集者，先用57種或144種沙門氏菌因子血清中的7種多價O血清檢查，如有其中一種血清凝集，則用這種血清所包括的O群血清逐一檢查，以確定O群。每種多價O血清所包括的O因子如下：OA l，2，3，4，5，9，10，12，19，2l，26,46OB 6，7，8，11，13，14,20，22，23，24OC 16，17，18，28，30，35，38OD 39，40，41，42，43，44，45OE 47，48，50，51，52OF 53，54，55，56，57，58，59OG 60，61，62，63，65,66，67（3）H抗原的鑒定屬于A—F各O群的常見菌型，依次用下述(表32一5)H因子血清檢查第1相和第2相的H抗原。不常見的菌型，先用144種沙門氏菌因子血清中的6種多價H血清檢查，如有其中一種或兩種血清凝集，則再用這一種或兩種血清所包括的各種H因子血清逐一檢查以確定第1相或第2相的H抗原。每一個H抗原成分的最后確定均應(yīng)根據(jù)H單因子血清的檢查結(jié)果，沒有H單因子血清的要用兩個H復(fù)合因子血清進(jìn)行核對。檢出第1相H抗原而未檢出第2相H抗原的，可在瓊脂斜面上移種1～2代后再檢查。如仍只檢出一個相應(yīng)的抗原，要用位相變異的方法檢驗其另一個相。單菌相不必作位相變異檢查。表325 A—F群見菌型H抗原表O群第1相第2相Aa無Βg,f,s無Βi,b,d2C1k,v, r ,c5 Z15C2b, d, r2，5D(不產(chǎn)氣的)d無D(不氣的)g m p q無E1h v6，w，xE2h6wE4g s t無E4iZ6Fi2HA a，b，c，d，i，Z10，Z29HB e，h；e，n，x；f，g；g，m，s；g，p；m，tHC k，l，v；r，y，Z，Z4，Z23HD 1，2；l，5；1，6；1，7；Z6HE Z35，Z36，Z38，Z39，Z41，Z42，Z44HF Z52，Z53，Z54，Z55，Z56，Z57（4）V1抗原的鑒定用V1因子血清檢查。已知具有Vi抗原的菌型有傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、都柏林沙門氏菌。5實驗結(jié)果綜合以上生化實驗和血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，按照考夫曼——懷特沙門氏菌屬抗原表解和補充表解判定菌型，并報告實驗結(jié)果。6 思考題（1）如何提高沙門氏菌的檢出率？（2）沙門氏菌在三糖鐵培養(yǎng)基上的反應(yīng)結(jié)果如何？（3）沙門氏菌屬檢測主要包括哪幾個主要步驟？實驗6 食品中志賀氏菌屬的檢驗1 目的要求（1）了解志賀氏菌的形態(tài)、培養(yǎng)以及生化反應(yīng)等特性。（2）學(xué)習(xí)志賀氏屬菌檢驗的基本原理和方法。2 基本原理志賀氏菌屬為埃希氏桿菌，包括痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌和宋內(nèi)氏志賀氏菌四群，是引起人類細(xì)菌性痢疾的病原菌。它們主要通過食品加工、集體食堂和飲食行業(yè)的從業(yè)人員中痢疾患者或帶菌者污染食物，從而導(dǎo)致痢疾的發(fā)生，是一種較常見的、危害較大的致病菌。志賀氏菌的鑒定主要根據(jù)血清學(xué)反應(yīng)，再以生化反應(yīng)證實。3 實驗材料3．1樣品：肉與肉制品、蛋與蛋制品、乳與乳制品等。3．2 設(shè)備和材料天平、均質(zhì)器或研缽、培養(yǎng)箱、顯微鏡、滅菌廣口瓶、滅菌平皿、酒精燈、載玻片、滅菌金屬匙或玻璃棒、接種棒、試管架。3．3 培養(yǎng)基和試劑GN增菌液、HE瓊脂、SS瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、三糖鐵瓊脂、半固體瓊脂、賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基、苯丙氨酸瓊脂、西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂、葡萄糖銨瓊脂、糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、緩沖葡萄糖蛋白胨水、VP試劑、甲基紅試劑、氧化酶試劑、革蘭氏染液、志賀氏菌屬診斷血清等。4 實驗方法與步驟4．1 志賀氏菌檢驗程序（如圖331）4．2 增菌稱取檢樣25g加入裝有225mL GN增菌液的500mI廣口瓶內(nèi)（固體食品應(yīng)用均質(zhì)器以8，000～10，000r/mi打碎1min，或用研缽研碎），于培養(yǎng)36177。1℃培養(yǎng)6～8h。檢 樣25g＋GN 225mlHE瓊脂或SS麥康覬或EMB挑取可疑菌落TSI，葡萄糖半固體36177。１℃，6－8h36177。１℃，18－24hTSI底層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)堿， H2S－，不產(chǎn)氣，無動力非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果血清學(xué)分型生化分群試驗志賀氏菌屬分群及分型結(jié)果進(jìn)一步的生化試驗葡萄糖銨試驗、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸、尿素、KCN、水楊苷和七葉苷葡萄糖銨＋或任何其他陽性結(jié)果非志賀氏菌非志賀氏菌報 告圖331 志賀氏菌檢驗程序4．3 分離 取一環(huán)增菌液，劃線接種于HE瓊脂平板或SS平板一個，麥康凱瓊脂平板或伊紅美蘭瓊脂平板一個，于36177。1℃培養(yǎng)18～24h.。志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無色透明的中等大小的光滑型菌落。4．4 生化試驗（1）志賀氏菌屬生化特性試驗挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和半固體瓊脂各一管。志賀氏菌在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果為底層產(chǎn)酸而不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可微產(chǎn)氣)，斜面產(chǎn)堿，不產(chǎn)生硫化氫，無動力，在半固體管內(nèi)沿穿剌線生長。然后再做VP\苯丙氨酸脫氨酶、賴氨酸脫羧酶、西蒙氏檸檬酸鹽和葡萄糖銨試驗，結(jié)果均應(yīng)陰性反應(yīng)。（2）志賀氏菌屬分群生化試驗 要將志賀氏菌屬分群，應(yīng)做5%乳糖、甘露醇、棉子糖和甘油的分解試驗，靛基質(zhì)試驗。結(jié)果見表331。要將志賀氏菌屬分型，還需進(jìn)行血清學(xué)試驗，具體為：挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，作玻片凝集試驗。先用四種志賀氏菌多價血清檢查，若因K抗原的存在而凝集被阻，應(yīng)煮沸菌液破壞K抗原后再檢查。若呈現(xiàn)凝集，則用AA2群多價和D群血清分別試驗。如系B群福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別試驗，確定菌型。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原的血清學(xué)鑒定見表33333。表331 志賀氏菌屬四個群的生化特性生化群5%乳糖甘露醇棉子糖甘油靛基質(zhì)A群：痢疾志賀氏菌（+）/+B群：福氏志賀氏菌++/+C群：鮑氏志賀氏菌++/+D群：宋內(nèi)志賀氏菌+/（+）++d注：+陽性，/+多數(shù)陰性，少數(shù)陽性，（+）遲緩陽性，d不同生化型。福氏志賀氏6型生化特性與A或C群相似。表332 福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原型和亞型型抗原群抗原1aⅠ9……1bⅠ9……2aⅡ4……2bⅡ9……3aⅢ9……3bⅢ（9）……3cⅢ6……4aⅣ（3）…4bⅣ6……5aⅤ4……5bⅤ9……6Ⅵ（4）……x9……y4……注：……均為省略號表333 福氏志賀氏菌的血清學(xué)鑒定群6可能的型和亞型+2a、1a、4a、y變種+＋1b、3b、4b＋+3a+2b、x變種66 實驗結(jié)果綜合以上生化和血清學(xué)的試驗結(jié)果，判定菌型并作出報告。（1）根據(jù)培養(yǎng)和生化試驗，有否檢出志賀氏菌？（2）根據(jù)生化特性和血清學(xué)試驗，檢出的志賀氏菌屬哪個群？哪個型？7 思考題（1）志賀氏菌屬有哪些重要的生化特性？（2）你認(rèn)為在志賀氏菌屬檢驗過程中，哪些試驗是不可缺少的?實驗7 食品中蠟樣芽孢桿菌的檢驗1目的要求（1）學(xué)習(xí)蠟樣芽孢桿菌檢驗的原理和方法。（2）了解臘樣芽孢桿菌食物中毒情況。2 基本原理蠟樣芽孢桿菌為需氧、能產(chǎn)生芽孢的革蘭氏陽性桿菌，在自然界分布較廣，食品在正常情況下就可能