水產(chǎn)微生物學實驗考題(編輯修改稿)
2024-10-29 06:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 涂布完后或在培養(yǎng)時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。五、實驗報告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計數(shù)準確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點及應用。(4)當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?三 光電比濁計數(shù)法一、目的要求1．了解光電比濁計數(shù)法的原理。2．學習、掌握光電比濁計數(shù)法的操作方法。二、基本原理當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標準曲線。然后，以樣品液所測得的光密度，從標準曲線中查出對應的菌數(shù)。制作標準曲線時，菌體計數(shù)可采用血細胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細胞干重測定等方法。本實驗采用血細胞計數(shù)板計數(shù)。光電比濁計數(shù)法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標準曲線。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進行測定。圖15—4 比濁法測定細胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計，血細胞計數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。（四）操作步驟1．標準曲線制作（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為7。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細胞懸液。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標，以每毫升細胞數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。各種操作條件必須與制作標準曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準確。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標準曲線查得每毫升的含菌數(shù)。（五）實驗報告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標準曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計數(shù)的原理是什么?這種計數(shù)法有何優(yōu)缺點?(2)光電比濁計數(shù)在生產(chǎn)實踐中有何應用價值?(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?四 大腸桿菌生長曲線的測定(一)目的要求1．通過細菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。2．復習光電比濁法測量細菌數(shù)量的方法。(二)基本原理大多數(shù)細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min分裂一次。將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。不同的細菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。用于測定細菌細胞數(shù)量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標)取樣測定，以測得的klett units為縱坐標，便可很方便地繪制出細菌的生長曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70m
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