酶的結(jié)構(gòu),純化及活性十一(編輯修改稿)
2025-02-02 09:42 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 參與代謝調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 六、同工酶（ isoenzyme） （一）定義： 催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面都存在明顯差異的一組酶。 （二）特點(diǎn)： 都是寡聚酶 不同的亞基組成 不同亞基的活性中心非常相似 組織分布部位不同 所催化的反應(yīng)有側(cè)重點(diǎn) 如： ? 生理及臨床意義 ? 在代謝調(diào)節(jié)上起著重要的作用； ? 用于解釋發(fā)育過(guò)程中特有的代謝特征； ? 同工酶譜的改變有助于對(duì)疾病的診斷； ? 可以作為遺傳標(biāo)志，用于遺傳分析研究。 心肌梗死和肝病病人血清 LDH同工酶譜的變化 1 酶活性 心肌梗死酶譜 正常酶譜 肝病酶譜 2 3 4 5 第四節(jié) 酶的分離純化與活力測(cè)定 一 .酶的分離純化 基本原則： 提取過(guò)程中避免酶變性而失去活性 ? 防止強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和劇烈攪拌等； ? 要求在低溫下操作，加入的化學(xué)試劑 不使酶變性，操作中加入緩沖溶液。 選材： 材料中酶含量要高且易于處理，然后對(duì)材料破碎，離心并收集目標(biāo)酶。 粗制分離： 用鹽析法、等電點(diǎn)沉淀法、有機(jī)溶劑分級(jí)分離法等對(duì)目標(biāo)酶進(jìn)行粗分離 精制分離： 用柱層析法、梯度離心等對(duì)粗酶進(jìn)一步純化 酶制劑的脫鹽、濃縮、干燥和保存 ? 用透析法、超濾法、凝膠過(guò)濾法來(lái)脫鹽； ? 用沉淀法、吸收法、超濾法等除去水分，稱濃縮； ? 用冷凍真空干燥法對(duì)酶做處理，便于運(yùn)輸；酶需低溫保存 基本操作程序 酶分離純化時(shí)的注意事項(xiàng) ?純化時(shí)保持低溫，溫度越低越好 ?使用溫和的操作條件 ?使用一些保護(hù)試劑，如金屬螯合劑等 ?盡量縮短純化時(shí)間 二、酶活力的測(cè)定 酶活力 ： 又稱為酶活性，通常以在一定條件下酶所催化的 化學(xué)反應(yīng)速度 來(lái)表示。 基本原理 : 最優(yōu)化條件下，當(dāng)?shù)孜镒銐?，酶促反?yīng)的初速度與酶的濃度成正比，化學(xué)反應(yīng)速度可代表酶活性分子濃度。 酶活力測(cè)定 酶活力測(cè)定就是測(cè)定一定量的酶，在單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物 (P)的生成量或底物（ S）的消耗量。 即測(cè)定時(shí)確定三種量： ①加入一定量的酶；②一定時(shí)間間隔；③物質(zhì)的增減量。 酶活測(cè)定時(shí)一般測(cè)定產(chǎn)物的增加量 在反應(yīng)過(guò)
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