補(bǔ)充2酶催化活性的測(cè)定方法(編輯修改稿)
2025-02-02 08:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 酶活性的結(jié)果計(jì)算 假設(shè)某一樣品的酶活性為 x（ U/L），取樣品量 Vs與底物緩沖液Vr孵育，延滯期為 t0分鐘，測(cè)定間隔時(shí)間為 t1分鐘，讀數(shù)次數(shù)為 n，每間隔時(shí)間吸光度變化平均值為 A，該產(chǎn)物的摩爾消光系數(shù)為 ε 比色皿光徑為 b（ cm）。反應(yīng)速度分別用產(chǎn)物的生成速度和樣品中酶的催化能力來表示 二、酶活性測(cè)定方法原理 （一）直接法 根據(jù)待測(cè)酶的酶促反應(yīng)底物或產(chǎn)物有特征性的理化性質(zhì)，然后通過特殊的儀器直接檢測(cè) NADH或 NADPH的反應(yīng)原理 NADH或 NADPH在 340nm處有特異吸收峰，而 NAD+或 NADP+只在 260nm處有明顯的吸收峰，監(jiān)測(cè) 340nm吸光度變化可以反應(yīng) NADH或 NADPH的變化。利用該原理可以 測(cè)定以 NAD（ P） +或 NAD（ P） H為輔酶的氧化還原酶 例如 LD、 G6PD、 α HBD、 AD、 SD、 GLDH等 一些水解酶類或轉(zhuǎn)移酶類經(jīng)過酶促反應(yīng)將化合物中的某一基團(tuán)水解或移去，使無顏色的底物轉(zhuǎn)變?yōu)橛蓄伾漠a(chǎn)物。人們把這類底物稱為色素原底物。根據(jù)這一原理，人們有意識(shí)地合成一系列底物用來測(cè)定酶活性，即人工合成色素原底物，利用這類底物測(cè)定的酶 2．基于人工合成
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