sod和pod酶活性的變化(編輯修改稿)
2025-03-20 13:21 本頁面
【文章內容簡介】 項 】 1. 酶液提取須在 4℃ 下進行，提取后立即進行測定，冰箱中放幾小時活性也會下降； 2. NBT反應液配好后過濾除去不溶物立即使用，若置于冰箱中要避光保存，充分搖勻然后使用。 3. 加反應液時最好在暗光下進行； 4. 核黃素產生 O2.－ ， NBT還原為籃甲潛都與光照密切相關，照光強度和時間要嚴格控制。 光照培養(yǎng)箱內壁裱糊錫箔紙，使箱內均勻光照約達 40μmolm2s1，同時使照光時間一樣，選擇試管盡量一致，照光結束后測一個拿一個（最好晚上做）（溫度高時照光時間縮短，溫度低時延長）； 5. 測定活性時加入的酶量，以能抑制反應的 50％為佳。（一個酶單位相當于引起反應液達到半抑制時酶的用量，即以能抑制反應 50％的酶量為一個 SOD酶活性單位。） （反應液中加酶液與 PBS調零差異不大，反應液調零與其它兩個則有一定差異。李合生方法： 2支 CK管均以緩沖液代替酶液。） 6. 測定數(shù)值應在 — 。 愈創(chuàng)木酚過氧化物酶（ POD）活性的測定 愈創(chuàng)木酚法 【 實驗原理 】 在過氧化物酶催化下， H2O2將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產物。此產物在 470nm處有最大光吸收，故可通過測 470nm下吸光值變化測定過氧化物酶活性。 【 試劑 】 ()的配制： A母液 :； B母液 :； 分別取 A母液 (Na2HPO4 ) B母液 (NaH2PO4 ) 100ml PBS(， )； （ ） 的配制： : ，稀釋 【 實驗步驟 】 1. 酶液提取 ：稱取 （可視情況調整）樣品（新鮮葉片或根系）洗凈后置于預冷的研缽中，分兩次加入 （ ml、 ml） （ ）在冰浴上研磨成勻漿，轉入離心管中在 4℃ 、 12022g下離心 15min，上清液即為 POD粗提液。 2. 酶活性測定 （ 1）反應混合液的配制：取 100mlPBS（ ， ） 緩沖液于燒杯中，加入 （ 2甲氧基酚）于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至溶解愈創(chuàng)木酚溶解， 待溶液冷卻后加入 ％的 H2O2，混勻后保存于冰箱中備用。 （ 2）酶活性測定：取 3ml反應液并加入 40μl酶液后測定OD470值在 40
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1