【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 驟 ：溫、濕度條件及樣本復(fù)溫等要求。 試劑使用方法、注意事項(xiàng)，試劑開封后注意事項(xiàng)等。 待測(cè)樣本的預(yù)處理方法、步驟及注意事項(xiàng)。 明確樣本檢測(cè)的操作步驟。 校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制方法。對(duì)需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。 質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。 結(jié)果計(jì)算：對(duì)于手工 /半自動(dòng)儀器，說明校準(zhǔn)曲 線擬合方式及結(jié)果計(jì)算方法。 10.【參考區(qū)間】應(yīng)按照不同性別及女性生理周期，分別說明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡(jiǎn)要說明參考區(qū)間的確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。 11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 應(yīng)對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。 明確有可能存在引起樣本濃度升高及降低因素，并說明在何種條件下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，以及在確認(rèn)試驗(yàn)時(shí)，對(duì)待測(cè)樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。 如樣本濃度超出線性范圍后，若申請(qǐng)人聲 稱樣本可可稀釋后檢測(cè)，應(yīng)明確樣本最大可稀釋倍數(shù)及稀釋液種類。 12.【檢驗(yàn)方法局限性】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容： 本試劑的檢測(cè)結(jié)果僅供參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀 /體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。 干擾物質(zhì)及鉤狀效應(yīng)（如適用）對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。明確干擾物對(duì)測(cè)定的影響，同時(shí)列出干擾物的具體濃度，不應(yīng)使用模糊的描述方式。明示出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達(dá)到一定數(shù)值時(shí)未發(fā)生鉤狀效應(yīng)。 13.【產(chǎn)品 性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)： 至少應(yīng)包括：檢出限、線性、準(zhǔn)確度、精密度（批內(nèi)精密度、批間精密度）、特異性。 14.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容： 出，恢復(fù)至室溫再打開使用，否則會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。 互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征（如參考區(qū)間或方法學(xué)）。 有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了 HBsAg、 HIV1/2Ab、 HCVAb 等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。提示對(duì)于潛在傳染源的處理方式。 。 ，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。 三、審查關(guān)注點(diǎn)（一）技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗(yàn)方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求； 技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021 年第 9號(hào)）的相關(guān)規(guī)定。 （二） FSH 預(yù)期值呈現(xiàn)性別、女性不同生理周期差異，在參考區(qū)間的確立 /驗(yàn)證過程中是否予以體現(xiàn)，樣本生理周期確定的依據(jù)是否科學(xué)合理。 （三）試劑（盒）的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。 （四） FSH 被測(cè)物質(zhì)在體內(nèi)有同功異構(gòu)結(jié)構(gòu)，臨床試驗(yàn)對(duì)比試劑盡可能選擇與考核試劑具有相同溯源性的。臨床試驗(yàn)采用的樣本類型及病例是否滿足試劑（盒）聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、統(tǒng)計(jì)方法及研究結(jié)果、臨床方案及報(bào)告撰寫的格式等是否符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021年第 16 號(hào)）對(duì)相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。 （五）由于促卵泡生成素與促黃體生成素（ LH）、促甲狀腺激素（ TSH）、人絨毛膜促性腺激素（ HCG）結(jié)構(gòu)類似，建議臨床試驗(yàn)過程中可適當(dāng)入組一些早孕及甲減等疾 病的樣本。 （六）說明書中預(yù)期用途、儲(chǔ)存條件及有效期、檢驗(yàn)方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評(píng)估資料的研究結(jié)論相一致。 （七）定量熒光免疫層析的產(chǎn)品可根據(jù)產(chǎn)品方法學(xué)特點(diǎn)選取適宜的試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)。 四、參考文獻(xiàn)（一）馮仁豐，《臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》，第二版，上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社， 2021 年 4 月（二）尚紅，王毓三，申子瑜 .《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》，第四版，人民衛(wèi)生出版社， 2021年 3 月第 1 版（三）HowtoDefineandDetermineReferenceIntervalsintheClinicalLaboratory。ApprovedGuideline， SecondEdition2021， CLSI/NCCLSC28A2（四）MethodComparisonAndBiasEstimationUsingPatientSamples。ApprovedGuideline， SecondEdition2021， CLSI/NCCLSEP9A2 五、編制單位天津市醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。 第二篇：酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技 術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對(duì)酶聯(lián)免疫類檢測(cè)試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 本指導(dǎo)原則系對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。 本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可 以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測(cè)的第三類體外診斷試劑的注冊(cè)技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。 三、基本要求 （一）基本原則 、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 — 2— 術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對(duì)試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條 件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。 ：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測(cè)有效。 （二）原材料質(zhì)量控制 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。 使用前應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。 主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：（ 1）外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生 — 3— 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個(gè)電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測(cè)。 （ 4）效價(jià) 效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含 量測(cè)定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （ 5）功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。 生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2021年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗(yàn)：將血清直接 37℃放臵 7 天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或 — 4— 沉淀。 總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量≥ 32mg/ml。 球蛋白含量：取待測(cè)血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測(cè)定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。 （ 2）牛血清白蛋白： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。 溶解性： 將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)≤ 15 分鐘， pH值應(yīng)為 。 總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95％。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95%。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（ 3）酪蛋白： 應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（ 4）標(biāo)記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 。 對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測(cè)定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。 3.化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測(cè)、溶液 pH 值 、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)?，均?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（ 2021 年版）》分析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。 （ 1）酶標(biāo)板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性采用合適的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。 一般用一定 濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算 CV 值。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。 （ 2）液體試劑裝量瓶 包括陰陽性對(duì)照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 — 6— 企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（ hook效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對(duì)于定量檢測(cè)試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè) 參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測(cè)樣品的基質(zhì)基本一致，如待測(cè)樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清 /血漿。 （三）試劑盒各組分的生產(chǎn) 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液