【正文】 促卵泡生成素檢測試劑注冊技術審查指導原則 5則范文 第一篇：促卵泡生成素檢測試劑注冊技術審查指導原則 附件 2 促卵泡生成素檢測試劑注冊技術審查指導原則本指導原則旨在指導注冊申請人對促卵泡生成素檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。 本指導原則是對促卵泡生成素檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。 本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調整。 一、適用范圍促卵泡生成素檢測試劑用于體外定量檢測人血清、血 漿 、 全 血 或 其 他 體 液 樣 本 中 促 卵 泡 生 成 素（ Folliclestimulatinghormone， FSH）的含量。本指導原則適用于以酶標記、（電）化學發(fā)光標記、（時間分辨）熒光標記等標記方法為捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體包被抗體，定量檢測 FSH 的免疫分析試劑，不適用于以膠體金標記的 FSH 定量檢測試紙條、用放射性同位素標記的各類放射免疫或免疫放射檢測試劑。根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5 號）和《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔 2021〕 242 號），促卵泡生成素檢測試劑應按照第二類醫(yī)療器械管理， 分類代號為 6840。 二、注冊申報資料要求（一）綜述資料促卵泡生成素是由垂體前葉嗜堿性細胞合成和分泌的一種糖蛋白類促性腺激素，可通過血液循環(huán)進入血液和尿液。像其它糖蛋白如促黃體生成素（ LH）、促甲狀腺激素（ TSH）和人絨毛膜促性腺激素（ HCG）一樣， FSH由兩個以非共價鍵結合的亞單位α和β亞基組成，分子量為 24000～ 35000，α 亞單位與LH、 TSH 和 HCG 結構相似，為垂體前葉激素所共有，β 亞單位是 FSH所特異的，因此，這些激素的生物學和免疫學特性的區(qū)別取決于其獨特的β亞基。對于男性，其功能是 促進睪丸曲細精管的成熟和精子的生成。對于女性，則可促進卵泡發(fā)育和成熟，促進顆粒細胞增殖，引起卵泡液分泌，并與 LH 協(xié)同調節(jié)和促使發(fā)育成熟的卵泡分泌雌激素和排卵，參與正常月經(jīng)的形成。 FSH 的增高多見于原發(fā)性睪丸衰竭、睪丸精原細胞瘤、先天性睪丸發(fā)育不全、先天性卵巢發(fā)育不全、原發(fā)性閉經(jīng)、原發(fā)性性腺功能低下、更年期綜合征； 其降低常見于席漢綜合征及長期服用性激素等。 綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中 同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從方法學、檢出限、線性范圍、準確度、參考區(qū)間及臨床適用范圍等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料作為注冊申報資料的重要組分之一，其內(nèi)容應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關要求。 （二）主要原材料研究資料（如需提供）應提供主要原材料如抗體、標記物、固相載體、校準品、質控品（如適用）等 的選擇、制備及其質量標準等的研究資料。主要原材料的研究資料具體要求如下： ，如為單克隆抗體應明確細胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、純度、效價等基本性能的驗證資料。 抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細生產(chǎn)及鑒定過程。 （如適用）和質控品（如適用）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。 GB/T214152021/ISO17511:2021《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質賦值的計量學溯 源性》提供所用校準品的來源、明確校準品的質量標準、賦值過程和相應指標以及不確定度等內(nèi)容，并提供校準品的溯源性文件（如適用）。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料（如需要提供）應包括以下內(nèi)容（以下內(nèi)容可根據(jù)具體的方法學特點進行編寫）： ，可以流程圖方式表示，并標明關鍵工藝質控步驟，簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 。 ：申請人應考慮如包被抗體濃度、包被緩沖液、表面活性劑等種類及添加量（如適用）、包被時間、干燥溫度及 時間（如適用）等工藝參數(shù)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。 ：申請人應考慮標記抗體的濃度、標記比例等內(nèi)容。 ：申請人應考慮反應模式、反應時間、反應溫度、洗滌次數(shù)（如適用）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。 。 ：申請人應考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑 的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對可用于樣本稀釋的基質或處理方法進行研究，通過試驗確定樣本稀釋基質或處理方法。確定反應所需其他試劑用量（標準品、標記物、底物等）的研究資料。 、信號放大系統(tǒng)、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及研究資料。 （四）分析性能評估資料申請人應提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。建議選擇不少于 3 批產(chǎn)品對以下分析性能進行研究，性能評估時最好將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。具體研究方法建議參照國內(nèi)外有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。 性能評估應至少包括檢出限、準確度、特異性、線性、精密度等。 對于本試劑，建議著重對以下分析性能進行研究： 、檢出限及參考區(qū)間等相關信息，根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)提供信息，對 5 份濃度近似 LOD的低值樣本進行檢測，每份樣本檢測 5 次，對檢測結果按照大小進行排序，符合如下條件，即可認為生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限和檢出限的設置基本合理： 低于生產(chǎn)企業(yè)提供的空白限數(shù)值的檢測結果的數(shù)量應小于或等于 3 個； 無高于生產(chǎn)企業(yè)提供的參考區(qū)間下限的檢測結果的 數(shù)值。 ：與國家標準品（和 /或國際標準品）的相對偏差、方法學比對、回收試驗等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇以下方法的一項或幾項進行研究。 準確度可選擇如下試驗方法之一： 將促卵泡生成素國家（或國際）標準品配制成試劑盒線性范圍內(nèi)高、低濃度的準確度樣品（至少 2 個）進行檢測，每個樣品測試 3次，根據(jù)公式（ 1）計算相對偏差。如果 3 次結果都符合規(guī)定，即判為合格； 如果大于等于 2次的結果不符合，即判為不合格； 如果有 1 次結果不符合規(guī)定，則應重新連續(xù)測試 20 次，分別計算相對偏差，如果大于等于 19 次測試的結果符合規(guī)定，即判為合格； ?????? .........??（ 1）式中： B— 相對偏差； Xi— 樣本的實測濃度均值； T— 樣本的靶值。 /國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少 40 例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。 用線性回歸方法對兩組結果進行線性擬 合，得到線性回歸方程的相關系數(shù)（ r）和斜率。計算各個樣本的待測試劑（盒）測定值與對照系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。 在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和比對試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行方法學比對。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。 將已知濃度的促卵泡生成素樣本（ A）加入到正常人血清或其他等效基質（ B）中，所加入促卵泡生成素樣本與正常人血清 B 之間的體積比例為 1:9，根據(jù)公式（ 2）計算結果應符合要 求。 ???????（ 2）式中： R回收率； V加入 A樣本的體積； V0血清樣品 B的體積； C血清樣品加入 A樣本后的檢測濃度； C0血清樣品 B的檢測濃度； Cs— A 樣本的濃度。 回收試驗應注意在保證總濃度在方法分析測量范圍內(nèi)，盡量使加入已知濃度的促卵泡生成素樣本（ A）后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學決定水平； 相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的人血清（或其他等效基質），且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍內(nèi)選擇 7～ 11 個濃度水平。例如，將預期測定范圍加寬至 130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。驗證線性范圍時可選擇 5～ 7個濃度水平。所選用的濃度水平應可覆蓋整個預期 測定范圍并包括與臨床有關的重要評價濃度，如最小測定濃度或線性范圍的最低限、不同的醫(yī)學決定水平、最大測定濃度或線性范圍的高限等。 2 個濃度水平的質控品，建議質控品采用人源樣本或與人源樣本基質接近的樣本進行試驗，質控品濃度都應在試劑的測量范圍內(nèi)，包括具有臨床代表意義的低濃度值和高濃度值。 一般包括批內(nèi)精密度、批間精密度的評價。 批內(nèi)精密度：在試劑的劑量 反應曲線范圍內(nèi)，設置 2～ 3 個不同濃度的質控品，用同一批號試劑，對不同濃度的質控品分別重復測定 10 次，計算測定結果的平均值（）和標準差（ s），根據(jù)公式（ 3）得出變異系數(shù)（ CV）。 CV=s/ 100%????????（ 3） 批間精密度：在 3 個不同批次試劑之間，在試劑的劑量 反應曲線范圍內(nèi)，設置 2～ 3 個不同濃度的質控品，對不同濃度的質控品分別重復測定 10 次，計算 30 次測定結果的平均值（）和標準差（ s），根據(jù)公式（ 3）得出變異系數(shù)（ CV）。 :易產(chǎn)生交叉反應的其他抗原、抗體等的驗證情況，應至少包括促黃體生成素樣本（ LH）、促甲狀腺素樣本（ TSH）、人絨毛膜 促性腺激素樣本（ HCG），交叉反應驗證物質的濃度應涵蓋人體生理及病理狀態(tài)下及臨床治療過程中可能出現(xiàn)的最高濃度值。 干擾物質 內(nèi)源性干擾物樣本中常見干擾物質對檢測結果的影響，如甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白、類風濕因子（ RF）及其干擾物質的研究。干擾物濃度的分布應覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質濃度。 樣本添加劑的干擾如果試劑（盒）適用樣本類型包括血漿（或全血）樣本，應采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿（或全血）樣本分別與血清樣本進行對比實驗研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一 病人的血清和血漿（或全血）樣本，以驗證申報試劑對于血清和血漿（或全血）樣本檢測結果的一致性。 試劑組成成分的干擾（如適用）應考慮防腐劑對檢測結果的干擾，如氟化鈉、碘乙酸、鹽酸等。 效應（如適用）目前，促卵泡生成素檢測試劑大多采用夾心法的原理檢測樣本，考慮到方法學的缺陷，有必要對鉤狀（ HOOK）效應進行考慮。建議采用高濃度的促卵泡生成素樣本進行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個梯度的抗原樣本重復 3— 5份，將響應值隨濃度升高反而變小時的濃度作為出現(xiàn)鉤狀效應時促卵泡生成 素抗原的最低濃度，建議產(chǎn)品說明書上明示出現(xiàn)鉤狀效應時促卵泡生成素的最低濃度，或濃度達到一定數(shù)值時未發(fā)生鉤狀效應。 （如適用）參照 GB/T214152021《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)工作校準品及試劑盒配套校準品的來源、賦值過程以及測量不確定度相關資料，提供質控品賦值及其質控范圍確定的相關資料。同時，應對校準品、質控品的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性（凍干品適用），以及其賦值結果的準確度進行評價。如校準品或質控品的基質不 同于臨床常用樣本類型，還應提交基質效應的相關研究資料。凍干型校準品和質控品還應檢測批內(nèi)瓶間差。 性能指標的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征進行，前提是必須保證研究的科學合理性。 對于適用多個機型的產(chǎn)品，應提供在所有適用型號儀器上進行的性能驗證資料。 若產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格且不同包裝規(guī)格間存在性能差異，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料； 如已驗證不同包裝規(guī)