氨基酸組成分析ppt課件-在線瀏覽
2025-06-18 04:16本頁(yè)面
【正文】 并充氮?dú)夥磸?fù)三次 (圖 ，真空控制也是實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的一項(xiàng)重要因 素 )110℃ 保溫 22h。如果遇到一些不易裂解的肽鍵，如 Val— Val， Ile— Leu等，水解時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)至 72h，但長(zhǎng)時(shí)間水解會(huì) 部分破壞含羥基的氨基酸 [絲氨酸 (Ser)，蘇氨酸 (Thr)，酪氨酸 (Tyr)]。 水解是第一步，水解的完全與否對(duì)結(jié)果影響很大。 但由于各種蛋門質(zhì)含有的氨基酸多少不同，并且每一種氨 基酸的量也不一樣，有的氨基酸含量可多到十幾個(gè)，有的 氨基酸含量只有 1～ 2個(gè)，這影響到氨基酸的回收。 第三節(jié) 特殊氨基酸的保護(hù)和定量 不同條件下，各種氨基酸的回收有所不同，但 色氨酸 均遭 破壞，通常解決方法有以下 5種。有報(bào)道 PerkinElmer公司針對(duì)其產(chǎn)品 ABI420A的特點(diǎn)，推出試劑十二烷基硫醇，專門保護(hù)色氨 酸，據(jù)稱回收率達(dá) 97％。 3．堿 用氫氧化鈉和氫氧化鋇代替酸水解，可保護(hù) 色氨酸 不被破壞。 5．光譜法 分光光度法和二階微分光譜法可測(cè)定色氨酸，前者應(yīng)用較早，在蛋白 質(zhì)分子中，如不含半胱氨酸和其他有干擾的發(fā)色基團(tuán)的氨基酸，根據(jù)其 在 6mol/L鹽酸胍的中性溶液中的紫外吸收，測(cè)定色氨酸和酪氨酸的含 量，此經(jīng)驗(yàn)公式只適用于色氨酸對(duì)酪氨酸的比值為 ～ 1時(shí)的情況。 Hewlett Packard公司推出的 DAD檢測(cè)器配合其化學(xué)工作站軟件， 能較方便地在線檢測(cè)并定量肽段中的色氨酸。 (1)還原烷化法 產(chǎn)生能抗水解的半胱氨酸衍生物。但這些方法有缺點(diǎn)，為了確保試劑接近巰 基，還原和氧化通常在變性劑存在下進(jìn)行，多余試劑和變性 劑要用 HPLC、沉淀法或透析去除，每一步都可能造成樣品的 損失，特別是對(duì)于小肽和微量樣品，而且烷化反應(yīng)如果不仔 細(xì)控制條件，可能導(dǎo)致半胱氨酸以外其他殘基的衍生。為克服這一 缺點(diǎn)，必 須準(zhǔn)備能分析兩次的樣品量，一次提供半胱氨酸數(shù)據(jù)，另一 次則提供其他氨基酸的組成數(shù)據(jù)。因?yàn)橥ǔ? 所用聚丙烯酰胺凝膠分離系統(tǒng)中含大量甘氨酸和 Tris鹽，易干擾氨基酸 原位分析，故改用 CAPS緩沖系統(tǒng)以減少影響。 l含 7％ (m/V)巰基乙酸的 6mol/L鹽酸以防止抽真空時(shí)膜片的漂 出，將水解指管放入水解反應(yīng)器中，在反應(yīng)器底部加入 200181。 l含 30 ％甲醇
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