氨基酸組成分析ppt課件(參考版)
2025-05-04 04:16本頁面
【正文】 幾種氨基酸分析法各有利弊，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)根據(jù)自己的 實(shí)際情況，如精確性、方便性、經(jīng)濟(jì)性等來選擇合適的方 法。食品和飼料中氨基酸分析采 用上述兩種方法均可。水解時(shí)間、水解溫度、真空度、樣品是否被氧化等，都影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果； 二是氨基酸的有效的衍生情況； 三是氨基酸色層分離好壞。有報(bào)道用 DABITC代替 DabsylCl，反應(yīng)產(chǎn)生 DABTHAA，在酸性 環(huán)境中顯紅色，易在 254nm， 269nm和 436nm檢測(cè)。 (5)DansylCl法 能與所有氨基酸柱前反應(yīng)形成高穩(wěn)定性的熒光產(chǎn)物，但反 應(yīng)耗時(shí)。 (4)PTCAA分析法 屬柱前衍生法，源于 Edman降解法測(cè)定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié) 構(gòu)。 0PA/FMOC作為柱前衍生劑能同時(shí)與一級(jí)胺和二級(jí)胺反應(yīng)，室溫下只 需幾分鐘， Hewlett Packard公司改用巰基丙酸 (3MPA)引代替巰基乙 醇。 OPA能在還原劑巰基乙醇存在下和一級(jí)胺產(chǎn)生具有很強(qiáng)熒光的異 吲哚衍生物，反應(yīng)迅速，在室溫下 1min即可完成，反應(yīng)絡(luò)合物的 Ex340～ 360nm， Em455nm，靈敏度比茚三酮法高，在 OPA中加入 SDS或表面活性劑 Brij— 35，不但能提高賴氨酸和羥賴氨酸的穩(wěn)定性， 而且能提高它們的熒光度。次級(jí)胺可以用 NChlorosuccinimide(NCS) 氧化生成相應(yīng)的初級(jí)胺后再與熒光胺反應(yīng)而檢出。目前此法的靈敏度可 達(dá) 100pmol，但茚三酮試劑易氧化，必須隔絕空氣避光保 存，試劑本身黏性大，需要有個(gè)柱后混合器才能與氨基酸充 分反應(yīng)，對(duì)儀器要求較高。 (1)茚三酮法 Spackman等人最早將茚三酮試劑運(yùn)用到氨基酸組成分 析上。另一種方法是將氨基酸和化學(xué)耦聯(lián)試劑先反應(yīng)生成氨基酸的 衍生物，然后再用色譜柱將各種衍生物分離，直接檢測(cè)衍生物的光吸收 或熒光發(fā)射，此法可檢測(cè) OPA、 PTC— 、 PTH— 、 DABS— 、 Dansyl 和 DABTH氨基酸，分析靈敏度高，可利用 HPLC進(jìn)行氨基酸分析，缺 點(diǎn)是有的衍生物不穩(wěn)定，衍生試劑可能干擾氨基酸檢測(cè)。 第五節(jié) 衍生方法及原理 從衍生角度看，氨基酸分析可以分為柱后反應(yīng)法和柱前衍生法兩大 類。 l含 7％巰基 乙酸的 6mol/L鹽酸， 1
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