氨基酸組成分析ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-01 04:16本頁(yè)面
【正文】 的穩(wěn)定性， 而且能提高它們的熒光度。缺點(diǎn)是不能檢測(cè)次級(jí)氨基酸，但可用稀的 Nahypochlorite在堿性條件下氧化成相應(yīng)的一級(jí)胺，然后再與 OPA反 應(yīng)。 0PA/FMOC作為柱前衍生劑能同時(shí)與一級(jí)胺和二級(jí)胺反應(yīng)，室溫下只 需幾分鐘， Hewlett Packard公司改用巰基丙酸 (3MPA)引代替巰基乙 醇。由于 3MPA的加入，異吲哚衍生物疏水性降低，使出峰時(shí)間提前， 過(guò)量的 FMOC及其分解產(chǎn)物的出峰時(shí)間在最后，被洗脫出的次級(jí)氨基酸 之后，不干擾分析結(jié)果。 (4)PTCAA分析法 屬柱前衍生法，源于 Edman降解法測(cè)定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié) 構(gòu)。異硫氰酸苯酯 (PITC)能在堿性條件下和氨基酸反應(yīng)， 生成 PTCAA，此法分析靈敏度和熒光胺、 OPA的熒光法 相同，優(yōu)點(diǎn)是能同時(shí)檢出初級(jí)和次級(jí)氨基酸，在 254nm檢 出，缺點(diǎn)是操作繁瑣，水和鹽的副反應(yīng)敏感，要求較高的操 作技術(shù)。 (5)DansylCl法 能與所有氨基酸柱前反應(yīng)形成高穩(wěn)定性的熒光產(chǎn)物，但反 應(yīng)耗時(shí)。 (6)DabsylCl法 靈敏度是 DansylCl法 1/5，但由于反應(yīng)產(chǎn)生有色衍生 物，能方便地在 254nm和 425nm處用紫外檢測(cè)。有報(bào)道用 DABITC代替 DabsylCl，反應(yīng)產(chǎn)生 DABTHAA，在酸性 環(huán)境中顯紅色，易在 254nm， 269nm和 436nm檢測(cè)。 第七節(jié) 結(jié) 語(yǔ) 影響氨基酸分析準(zhǔn)確性和重復(fù)性的因素有三個(gè)： 一是樣品的水解。水解時(shí)間、水解溫度、真空度、樣品是否被氧化等，都影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果； 二是氨基酸的有效的衍生情況； 三是氨基酸色層分離好壞。不同樣品采用不同的分析方法， 生理樣品含有 30～ 50種氨基酸，用離子交換色譜柱后衍生 法比較合適，天然氨基酸、合成多肽樣品的氨基酸測(cè)定多采 用反相色譜柱前衍生分析方法。食品和飼料中氨基酸分析采 用上述兩種方法均可。因?yàn)榉聪嗌V柱前衍生法具有快速和 靈敏的特點(diǎn)，在藥物和手性氨基酸的分析中同樣也獲得廣泛 的應(yīng)用。 幾種氨基酸分析法各有利弊，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)根據(jù)自己的 實(shí)際情況，如精確性、方便性、經(jīng)濟(jì)性等來(lái)選擇合適的方 法。
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